解剖学报 ›› 2023, Vol. 54 ›› Issue (6): 738-743.doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.06.017
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小鼠棕色脂肪透射电子显微镜样品固定方法的改良
魏纯纯1 王平2 林方兴3 麻献华1 章卫平1,2 谢志芳1,4*
1.海军军医大学病理生理学教研室,上海 200433; 2.国家卫生健康委员会激素与发育重点实验室(天津医科大学),天津市代谢性疾病重点实验室、天津医科大学朱宪彝纪念医院 & 天津市内分泌研究所,天津 300134; 3.海军军医大学生物物理学教研室,上海 200433; 4.上海交通大学医学院附属新华医院环境与儿童健康重点实验室,上海 200092
An improved fixation method for preparing mouse brown adipose tissue for transmission electron microscopy
WEI Chun-chun1 WANG Ping2 LIN Fang-xing3 MA Xian-hua1 ZHANG Wei-ping1,2 XIE Zhi-fang1,4*
1. Department of Pathophysiology, Naval Medical University, Shanghai 200433, China;
2.NHC Key Laboratory of Hormones and Development (Tianjin Medical University), Tianjin Key Laboratory of Metabolic Diseases, Tianjin Medical University Chu Hsien-I Memorial Hospital
& Tianjin Institute of Endocrinology, Tianjin Medical University, Tianjin 300134, China;
3.Department of Biophysics, Naval Medical University, Shanghai 200433, China;
4.Ministry of Education Shanghai Key Laboratory of Children’s Environmental Health, Xinhua Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200092, China
摘要:
目的 改良小鼠棕色脂肪组织透射电子显微镜样品固定方法,以获得更好的线粒体和脂滴的超微结构。 方法 对小鼠棕色脂肪组织的固定方法进行优化,主要包括将前固定剂中多聚甲醛的浓度从2%提高到4%;将后固定剂四氧化锇的缓冲液换成咪唑缓冲液;同时采用心脏灌注和浸泡结合的固定方式。比较两种方法制备的细胞超微结构(每组3只小鼠);并将改良后的方法应用于线粒体和脂滴的定量分析实验。 结果 与改良前相比,用改良后的方法制备的棕色脂肪细胞的线粒体嵴及其他膜性细胞器的结构更完整;脂滴呈现为高电子密度的圆形结构。用该方法观察到了冷适应后棕色脂肪细胞线粒体嵴密度升高和脂滴增多现象。 结论 改良后的方法能更好地保存棕色脂肪细胞中的细胞器特别是线粒体和脂滴的超微结构,可应用于研究该类型细胞在不同生理或病理条件下发生的超微结构变化。
中图分类号: