解剖学报

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冯建坤高建红

2019 (2): 241-244. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.016

摘要 ( )

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目的应用锥形束CT(CBCT）探讨52例青少年骨性安氏Ⅱ类高角错畸形切牙区骨开窗和骨开裂的发生率及分布情况，为临床正畸治疗提供一定的依据。方法自2013年7月至2018年1月于承德市口腔医院进行CBCT检查的患者中，随机选取临床诊断为骨性Ⅱ类高角错畸形青少年病例52例，将其扫描数据导入SIDEXIS XG 2.56软件，在测量平面上根据定义诊断上下切牙区牙槽骨骨开窗和骨开裂，并采用χ²检验的方法对其分布在性别、上下颌骨、牙位间的差异进行数据分析。结果在样本人群中牙槽骨缺损的发生率高达86.53%。其中骨开窗和骨开裂的发生率分别为65.38%和67.30%。416颗纳入牙中82颗牙齿出现骨开窗,107颗牙齿出现骨开裂。骨开裂发生率在牙位间差异显著（P<0.05)。骨开窗发生率上下颌骨差异无统计学意义（P>0.05）,骨开裂则主要发生于下颌骨（P<0.05)。男性与女性切牙区牙槽骨骨开窗与骨开裂的发生率差异无显著性。结论青少年骨性安氏Ⅱ类高角错畸形患者在正畸治疗前切牙区即存在广泛的牙槽骨缺损，正畸治疗开始前及过程中医师应密切关注患者牙槽骨解剖形态。

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包含中国人群解剖学差异的Web端三维器官模型可视化系统的构建及应用

王洪凯张楠孙孝邦张延军霍力于丽娟石洪成张宾

2019 (2): 220-226. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.012

摘要 ( )

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目的数字三维解剖模型对于解剖学教育和临床医疗研究起到了积极的推动作用。现有的中国人数字三维模型多是基于一个标准的人类个体，不包含人与人之间的解剖形态变化差异，不利于使用者了解器官形态在不同人之间的变化。我们提出了1种基于万维网（Web）端的三维可视化人体躯干解剖形变模型，在浏览器网页中展示中国人群的器官解剖形态变化规律。方法通过统计形状模型技术，从138例健康中国人计算机断层扫描（CT）影像中学习到器官形态个体差异，并通过Web端浏览器交互展示这种变形差异。结果本系统实现了基于网络的操作模式，通过用户交互式操作调整模型参数来展示人体解剖学信息和个体间变化。结论本研究中的Web端三维可视化解剖形变模型实现了跨平台、跨操作系统，达到了实时操作，为解剖教学与医疗应用提供了个体差异信息。

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基于CT三维重建的中国人喙突形态学测量及临床意义

曾胜强马丽张磊汪国友扶世杰郭晓光邓凯暴丁溯

2019 (2): 227-231. doi: 10.16098/j.issn.0529.1356.2019.02.013

摘要 ( )

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目的通过对肩胛骨CT扫描三维重建，了解喙突的解剖形态学特点，为临床上相关疾病诊断和治疗提供解剖学依据。方法选取西南医科大学附属中医医院，因病情需要对肩胛骨行CT三维重建的256例患者影像学资料，并测量喙突相关解剖学数据，并进行对比和分析。结果统计了256例喙突三维重建模型的解剖学数据，测得喙突尖部的宽度为（14.31±2.71）mm，尖部的厚度为（8.79±1.44）mm，折返部的宽度为（22.87±2.82）mm，折返部的厚度为（14.68±2.39）mm，基底部的宽度为（26.29±3.05）mm，基底部的厚度为（10.71±3.01）mm，尖部到折返部的长度为（40.49±4.10）mm，折返部到基底部的长度为（19.36±2.35）mm。且在左右对比中发现，喙突尖厚度、折返部宽度、折返部到基底部长度差异存在显著性（P<0.05），而喙突的其他解剖形态差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 CT三维重建能够全面准确地观察到喙突的解剖学结构，提供喙突解剖学参数。

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后半规管非平面性对夹角测量的影响

杨晓凯郑炎焱陈晓素

2019 (2): 232-235. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.14

摘要 ( )

PDF(3772KB) ( )

目的测量后半规管夹角，观察后半规管非平面性对夹角测量的影响。方法对20例磁共振三维稳态构成干预序列内耳检查影像进行分析，通过使用3D Slicer 4.4软件直接测量左、右后半规管的夹角来推算后半规管和矢状面的夹角。结果左、右后半规管夹角为90.5°±8.9°，最小夹角73°，最大夹角108°。可推算后半规管和矢状面夹角为45.3°±4.4°,最小36.5°，最大54°。结论后半规管切面经过或不经过共脚，由此导致夹角测量差异约为9°，故此次测量数据和既往研究相符，但本方法更加直观方便。

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浙江地区成年人骨性眶缘测量及其与衰老的关系

潘蕾冯微赵烨金婷婷李婧宇吴溯帆

2019 (2): 236-240. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.015

摘要 ( )

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目的考察颅面部骨性眶缘的参数（眶缘面积、上下眶缘对角线长度、内外眶缘对角线长度）在不同性别中的差异及其在面颅老化中的意义，为临床年轻化治疗提供思路和解剖学依据。方法采集114例不同年龄段的浙江籍成年人（青年男性22例、女性20例，中年男性23例、女性14例，老年男性18例、女性17例）颅面骨薄层CT扫描数据进行三维重建，将三维图像导出，采用Adobe Photoshop（2018版）软件测量上下眶缘对角线（L1）和内外眶缘对角线（L2）长度及骨性眶缘面积（S），对眶缘面积进行分区（S1、S2、S3、S4）测量和分析，对比不同性别和年龄组之间以上参数的差异。结果随年龄增大，男女性上下对角线长度有显著增加（P<0.05），但不同性别L1长度发生显著增长的时间段不同，在中年组出现显著的性别差异；各个年龄组内男性的内外对角线长度均大于女性（P<0.05），但L2不随年龄增长而变化（P>0.05）；男性的骨性眶缘总面积随年龄变化不明显，但眶缘平面分区面积S1、S2、S3随年龄增长而增大，S4反而缩小；女性骨性眶缘面积整体上随衰老而增大，增大的主要为眶下半部，即S3和S4区域。在中年期男性的骨性眶缘面积大于女性（P<0.05）。结论浙江籍成年人的骨性眶缘面积随衰老而发生变化，男性与女性的变化模式具有不同特征。女性的骨性眶缘面积增大更明显，主要表现为眶下半部扩大。男性眶缘总面积虽然随老龄化无明显改变，但其区域面积和形态发生变化。

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MicroRNA-140-5p通过蛋白激酶C亚型ε促进肾癌细胞增殖

刘伟红余肖任雨刘开泰林晨王萍

2019 (2): 185-191. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.008

摘要 ( )

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目的探讨microRNA-140-5p(miR-140-5p)在肾癌发生中的作用。方法 Real-time PCR方法检测肾癌细胞（Caki-1、ACHN、OS-RC-2和786-O）中miR-140-5p的表达。MTS，流式细胞术和Western blotting检测细胞增殖，细胞周期和相关蛋白的改变。结果降低Caki-1细胞中miR-140-5p的水平后，细胞增殖被抑制，G₀/G₁期细胞数量显着增加，cyclin D、cyclin E和CDK2、CDK4也随之减少；此外，增加786-O细胞中miR-140-5p的水平后，促进体外细胞增殖和体内肿瘤发生。基因芯片结果发现，蛋白激酶C亚型ε（PKCε)基因在改变Caki-1和786-O的细胞中显著性升高。siPKCε在降低肾癌细胞（RCC)中PKCε蛋白表达的同时，还能显著性反转抑制物/模拟物诱导的细胞增殖和细胞周期的改变。结论 miR-140-5p通过PKCε促进肾癌细胞增殖。

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丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型在人肺腺癌组织表达上调并促进肺腺癌细胞的增殖

陆畅畅黄燕燕续力云何剑营邱雷乐涵波

2019 (2): 192-200. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.009

摘要 ( )

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目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型（SPINK1）表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达，并分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系。利用SPINK1慢病毒表达载体及小干扰RNA(si RNA)，处理人肺腺癌细胞系，光学显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，ELISA或Real-time PCR检测SPINK1表达水平，细胞计数和集落形成法检测肺腺癌细胞生长情况。结果肺腺癌组织SPINK1 mRNA和蛋白表达均上调（均 P<0.0001），SPINK1高表达组患者总生存时间短于低表达组（50.0个月vs 64.5个月，P＜0.001）。SPINK1过表达组，肺腺癌细胞上清液SPINK1蛋白高表达（P<0.05），增殖与克隆形成能力均上调（P<0.05）； SPINK1敲减组，肺腺癌细胞SPINK1 mRNA表达下调，增殖能力下调（P<0.05）。结论肺腺癌组织SPINK1高表达提示患者预后不良；SPINK1促进人肺腺癌细胞的增殖。

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国内建立的人肿瘤细胞系的身份认证问题及对策

卞晓翠刘玉琴杨振丽冯海凉

2019 (2): 201-210. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.010

摘要 ( )

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目的为国内建立的人肿瘤细胞系进行身份认证，确认这些细胞系使用的可靠性。方法收集、整理国内实验室建立的人肿瘤来源细胞系，提取细胞的基因组DNA，PCR扩增其中的多个短串联重复序列（STRs）位点后进行毛细管电泳，分析获得细胞的STR图谱作为细胞系的DNA指纹，然后与原始组织或国际数据库中已有细胞的STR谱进行比对，通过匹配度的高低判断该细胞是否被其他细胞交叉污染。对怀疑HeLa细胞污染的肿瘤细胞，检测其基因组中是否有人乳头瘤病毒18型（HPV-18）病毒插入片段。对怀疑T细胞白血病细胞污染的，则检测T细胞的各种特性（表面标志），根据表面标志表达情况判断是否为错误细胞。结果本研究共收集了37种国内建立的肿瘤细胞系46个样品。本中心建立的6株细胞系均STR正确。其他单位建立的细胞系中有8株系正确，有23（62.2%）株系认定为错误细胞，人宫颈癌细胞HeLa是主要污染源；另外发现有些国内自建的细胞系被人结直肠癌细胞HCT-8、宫颈鳞癌细胞SiHa、T细胞白血病细胞CCRF-CEM及大鼠细胞污染。结论国内建立的肿瘤细胞很高比例地发生了细胞间的交叉污染，科研人员在实验前一定要首先进行细胞身份认定，或者从国家实验细胞资源共享服务平台选择细胞。另外，建立细胞系时保留原始组织用于后续细胞系的身份认证。

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三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制

代金林旭郭梦姚张静张文静薛刚吴靖芳

2019 (2): 211-219. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.011

摘要 ( )

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目的探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。方法包装TFF3 shRNA 慢病毒载体，病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株；生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况；流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）4 mRNA的表达情况；免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B（Akt）、pAkt的蛋白表达水平。结果成功包装TFF3 shRNA 慢病毒载体，病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株；生长曲线和集落形成实验结果显示，沉默TFF3后，细胞增殖能力减弱；流式细胞术结果显示，与对照组相比，TFF3基因沉默组G₁期的细胞比例明显增高(*P<0.05)，S和G2期的细胞比例明显下降（*P<0.05)；TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调（*P<0.05)，而cyclin D1，CDK4 mRNA和蛋白表达降低（*P<0.05)；4株细胞Akt蛋白含量无明显差异，但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B（pAkt）表达减弱；免疫细胞化学染色显示,cyclinD1阳性蛋白位于癌细胞胞核，P27、P21蛋白表达于胞质和胞核，且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强，细胞质中阳性表达降低。结论沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期，抑制细胞的增殖，可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路相关蛋白的表达有关。

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卫藏藏族、康巴藏族和安多藏族女青年唇形特征

钟铧王飞李晓箐李广余丽霞次仁白玛多吉楚多罗桑刘亚丽丁亚丽

2019 (2): 245-248. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.017

摘要 ( )

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目的探讨藏族女青年的唇形特征。方法根据知情同意原则，以自愿参加的藏族女青年为研究对象，有效样本542例，年龄18～23岁，平均年龄（20.42±1.34）岁。利用直角规直接测量被测者的口裂宽和唇高，并计算唇指数。结果藏族女青年唇高均值为（18.01±4.29）mm，口裂宽均值为（49.40±5.55）mm，唇指数均值为（36.60±8.21）mm。康巴藏族的唇高和唇指数均值与卫藏藏族和安多藏族比较差异均有显著性（P<0.01），卫藏藏族的口裂宽均值与安多藏族比较差异均有显著性（P＜0.01）。唇高与年龄成负性相关（r=-0.124，P<0.01），唇指数与年龄成负性相关（r=-0.155，P<0.01），口裂宽与年龄相关性无统计学意义（P＞0.05）。结论康巴藏族唇高较高，安多藏族具有更阔的口裂宽。藏族女青年唇高和唇指数随年龄递增而减小，唇形特征以中唇型（69.2%）和宽口裂（73.6%）为主。

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猕猴胸骨柄性差及与锁骨、股骨长的相关性

赵晓进韩霄帆王凤产

2019 (2): 249-253. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.018

摘要 ( )

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目的探讨猕猴胸骨柄性差特征、胸骨柄与锁骨、股骨长的相关性。方法太行山猕猴胸骨、锁骨和股骨标本45例（雄13例，雌32例）。选择6个线性测量变量，包括胸骨变量4个、锁骨长和股骨长。数据分析采用SPSS 22.0统计学软件，计算变量之间相关系数和偏相关系数。性别之间差异采用独立样本t检验。受试者工作特征曲线（ROC）分析得到每个变量识别性别的灵敏度和特异度。结果 t检验显示胸骨变量性别差异显著（P<0.05）。胸骨柄前面宽正确判别率较高（84.4%），后面宽相对较低（66.7%）。胸骨变量与锁骨长相关性较强，与股骨长相关性较弱，通过胸骨柄去推测猕猴个体大小时误差较大。结论利用猕猴个体的胸骨柄标本可以识别个体的性别。运动方式和生活习性是造成胸骨形态特征差异的主要因素。

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中青年头晕与颈椎曲度异常的相关性

王英谭军

2019 (2): 254-258. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.019

摘要 ( )

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目的探讨中青年患者头晕与颈椎生理曲度改变的相关性。方法收集2016年6月～2017年3月于新乡医学院第三附属医院神经内科住院治疗的中青年头晕患者，共78例，其中男性32例，女性46例。对所有患者拍摄颈椎4位片，根据Borden测量法将所有患者分为颈椎曲度正常组（n=22例）与颈椎曲度异常组（n=56例），分析两组之间的临床特点，探讨颈椎曲度改变与头晕不同分型的相关性。结果颈曲异常组患者入院ABCD2评分、头晕临床症状显著高于颈曲正常组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。颈椎曲度异常与不同头晕分型之间具有高度正相关（P＜0.01）。结论随着患病时间的延长，颈椎生理曲度改变的加重，中青年头晕的临床症状也越来越严重。

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中国蒙古族的身体密度

李咏兰郑连斌

2019 (2): 259-263. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.020

摘要 ( )

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目的探讨蒙古族13个族群的身体密度，揭示蒙古族身体密度性别间、族群间差异，探讨身体密度与经度、纬度、年平均温度、年龄的相关性。方法测量肱三头肌皮褶、肩胛下皮褶厚度。按照日本长岭晋吉公式计算蒙古族13个族群的身体密度。结果蒙古族13个族群中，云南蒙古族身体密度值最大，额济纳土尔扈特部身体密度值最小。蒙古族身体密度族群间、性别间、年龄组间、4个地区间的差异均具有统计学意义。蒙古族男性女性身体密度均与经度、年龄成显著负相关。结论南方蒙古族身体密度值大于北方蒙古族，西部蒙古族身体密度大于东部蒙古族。

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智能手术刀执刀训练教学模型设计与实验

余梦张伟涛张鹏李浩旭

2019 (2): 264-268. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.021

摘要 ( )

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目的有效提升手术刀执刀训练实验教学效果和降低实验环境要求，改变现有实验教学手段单一的局面。方法提出了一种智能手术刀执刀训练教学指导模型的设计方法，并进行了2版的修正设计和实验。结果所设计的教学指导模型不但能模拟解剖工作场景，还具有手术刀执刀手法及动作的智能识别功能，可以感知握刀的手型、倾角、用力大小、入刀和出刀动作、行刀方向、速度、距离等。通过运用4种执刀法的训练预案，可实现手术刀执刀训练，交互式语音指导和训练成果评价的整个实验教学指导过程。结论教学指导模型可有效提升执刀训练教学的效果和效率，是一种值得推广的医学实验教具和训练设备。

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白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后小胶质细胞系N9活化的影响

廖鸿雁刘杰刘菁郭霜杨琴

2019 (2): 137-144. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.001

摘要 ( )

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目的探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞系N9活化的影响。方法体外培养的N9小胶质细胞行氧糖剥夺150 min，复氧培养24 h。实验分为正常组（Nor）、对照组(Ctrl)和白藜芦醇预处理组(Res)。细胞计数盒-8（CCK-8）法测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫荧光法检测Iba1蛋白表达，Western blotting检测钙离子接头蛋白1（Iba1）、CD11b、Caspase-3、Bax、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β蛋白表达，ELISA法检测培养细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-1β蛋白含量。结果 CCK-8 法检测结果显示，OGD/R损伤后对照组、1、5、20、40和80 μmol/L白藜芦醇组细胞活力均较正常组降低（P＜0.05，n=3），但5、20和 40 μmol/L白藜芦醇组细胞活力较对照组显著增强（P＜0.05，n=3），以20 μmol/L组最强。流式细胞术、免疫荧光、Western blotting和ELISA法显示，对照组和白藜芦醇组CD11b、Iba1、Caspase-3、Bax、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达或含量或凋亡细胞百分比均显著高于正常组（P＜0.05，n=3），但白藜芦醇组除IL-10蛋白表达或含量较对照组增高外，其余均低于对照组（P＜0.05，n=3）。结论白藜芦醇预处理可抑制OGD/R后小胶质细胞的活化及凋亡，减轻炎症反应。

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γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用

刘宗秀张紫微周晓红成媛高维娟

2019 (2): 145-151. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.002

摘要 ( )

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目的探讨γ-分泌酶抑制剂（3,5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）对脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后的神经保护作用。方法 SD大鼠33只，脑缺血模型制造成功后，随机平均分为3组：模型组、神经干细胞移植组（移植组）、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7d观察各组大鼠神经行为学改变；TTC染色观察脑梗死体积；尼氏染色观察脑组织病理形态学变化；免疫荧光双标检测BrdU/神经元核抗原（NeuN）阳性细胞表达。结果假手术组神经功能学评分为零，无脑梗死灶，细胞形态完好，尼氏小体丰富，BrdU/NeuN阳性细胞表达阴性；与假手术组相比，模型组神经功能学评分增加，有明显神经功能缺损症状，可见明显脑梗死灶，神经细胞排列紊乱，可见核固缩，尼氏小体稀少，存活神经元数量显著减少(P＜0.05)，有少量BrdU/NeuN阳性细胞表达(P＜0.05)；与模型组比较，移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低，脑梗死体积缩小，神经细胞存活数量增加( P＜0.05)，BrdU/NeuN阳性细胞表达增多(P＜0.05)，以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化，对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。

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小鼠背根神经节慢性压迫引起的痛敏化机制

陶金王涛朱杰马超

2019 (2): 152-157. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.003

摘要 ( )

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目的探讨背根神经节慢性压迫（CCD）引起的低剂量辣椒素诱发痛敏化机制。方法将光滑L型钢柱插入小鼠的L4椎间孔，对背根神经节（DRG）造成持续压迫，建立小鼠CCD模型。于CCD术前1 d及术后第1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮下注射不同浓度的辣椒素（0.01、0.1、1 g/L）10 μl后采用行为学检测动物的痛行为学表现并录像，以寻找CCD术后辣椒素诱发痛行为差异最显著的浓度。利用Pirt-GCaMP3转基因小鼠，胫骨前区皮下注射最佳浓度辣椒素，利用激光扫描共焦显微镜在体记录DRG神经元对外周体表感受野辣椒素刺激的反应。利用免疫荧光染色技术观察正常及CCD模型压迫5 d后DRG内辣椒素受体（TRPV1）的表达变化。结果行为学检测结果显示，与正常小鼠相比，低浓度（0.1 g/L）辣椒素在CCD模型小鼠上引起的诱发痛显著提升（n=8; 术后1 d，P<0.01；术后5 d，P<0.05；术后7 d，P<0.05；术后3 d，P> 0.05）。在体激光扫描共焦成像结果表明，在记录的398（n=4）个正常小鼠L4 DRG神经元中，对皮下注射0.1 g/L辣椒素有反应的神经元为75个，在382（n=6）个CCD术后5 d的小鼠L4 DRG神经元中，对皮下注射0.1 g/L辣椒素有反应的神经元为169个，差异有显著性（P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，在653（n=10）个正常神经元中，TRPV1阳性的细胞数为148，在611（n=6）个CCD神经元中，TRPV1阳性的细胞数为237，差异有显著性（P<0.01）。结论在小鼠CCD模型中，受到压迫DRG神经元TRPV1表达上调，导致相应的体表感受区域对辣椒素诱发痛敏化。

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半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 对脑缺血再灌注大鼠脑皮质中热休克蛋白70、微管相关蛋白轻链3蛋白表达和神经元超微结构的影响

陈萌杜超田焕娜王爱乐夏晓晓

2019 (2): 158-165. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.004

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目的应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠，检测热休克蛋白70(HSP70)和微管相关蛋白轻链3(LC3) 蛋白的表达，观察其对神经元超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠60只，随机分成5组：假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)，Cys C低浓度组(Cys C1)、Cys C中浓度组(Cys C2)、Cys C高浓度组(Cys C3)，每组12只。采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型，缺血2 h再灌注24 h后进行改良神经功能损伤严重程度评分(mNSS)。Western blotting半定量检测损伤中心脑皮质组织中HSP70、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达；免疫组织化学法检测HSP70、LC3的阳性细胞个数；免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3和神经元核抗原(NeuN)共染的阳性细胞平均吸光度值；透射电子显微镜下观察神经元超微结构的变化。结果与IR组相比，Cys C1、Cys C2组mNSS评分明显减少(P<0.05)，HSP70的表达较IR组明显升高(P<0.01)；而Cys C3组mNSS评分升高，与IR组差别无显著性 (P>0.05)；Cys C3组HSP70的表达明显降低(P<0.01)；Cys C各浓度组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达有不同程度的升高(P<0.01)；LC3和NeuN共染阳性细胞平均吸光度逐渐增强(P<0.05)；透射电子显微镜结果显示，Cys C1、Cys C2组神经细胞的超微结构有所改善，而Cys C3组脑皮质神经细胞损伤较重。结论 Cys C可能在一定浓度范围内对缺血再灌注损伤神经细胞有保护作用。浓度过高则导致神经细胞自噬性死亡。

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敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ抑制干扰素-γ诱导C2C12细胞免疫分子的表达

李俊桦马永能谷瑞彩廖华

2019 (2): 166-172. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.005

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目的探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ（CaMKⅣ）基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响。方法采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因，以2%马血清将C2C12细胞分化成肌管，以干扰素-γ（IFN-γ）刺激C2C12细胞，采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达，采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体（MHC） class Ⅰ(H-2K^b)、MHC class Ⅱ(H2-Ea)、Toll样受体3（TLR3）的表达，采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和单核细胞趋化因子（MCP）-1的基因表达。结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3，同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量；敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制。结论敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达，可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性。

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氯离子通道蛋白1在心肌纤维化进程中的表达特征

田香勤谭朝阳李新芝马克涛李丽司军强

2019 (2): 173-178. doi: 10.16098/j.issn.0529.1356.2019.02.006

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目的探讨氯离子通道蛋白1（ANO1）在心肌纤维化进程中的表达特征，为抑制心肌纤维化寻找新的靶点。方法采用冠状动脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型，1周后取心肌梗死组和假手术组大鼠左心室组织，采用免疫组织化学染色、免疫荧光双标记检测梗死区和正常组织ANO1表达的变化；体外分离培养心肌成纤维细胞，采用免疫荧光标记、Real-time PCR和Western blotting检测心肌成纤维细胞中ANO1表达情况。结果制造模型1周后心肌梗死区ANO1表达明显增强，并与α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）共表达；ANO1蛋白明显表达于心肌成纤维细胞的核膜和胞质中，且表达强度和α-SMA具有相同的趋势；与刚分离贴壁心肌纤维细胞相比，ANO1在培养和48 h后的心肌成纤维细胞中表达量明显增强。结论 ANO1在心肌成纤维细胞转化为成肌纤维细胞过程中表达量增加，提示ANO1可能在心肌纤维化进程中发挥重要调控作用。

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对氧磷酶3基因过表达对急性中毒小鼠肝损伤的保护作用及机制

伍洋刘英刘济滔尹德锋

2019 (2): 179-184. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.02.007

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目的探讨对氧磷酶3（PON3）对急性中毒肝损伤的保护作用及作用机制。方法将40只Balb/c小鼠随机分为4组，正常对照（NC）组、敌敌畏（DDVT）对照组、绿色荧光蛋白慢病毒（Lv-GFP）组和重组PON3慢病毒（Lv-PON3）组，每组10只。LV-GFP组和Lv-PON3组小鼠经尾静脉分别注射2×10⁷ TU的Lv-GFP、Lv-PON3慢病毒，3 d后腹腔注射敌敌畏（DDVT）溶液9 mg/kg，DDVT组只需腹腔注射同等剂量DDVT，NC组注射同等剂量生理盐水。各组于DDVT染毒后12 h麻醉处死10只小鼠取肝组织，ELISA法检测各组血清乙酰胆碱酯酶（AChE）、肝功能指标谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）和肝组织氧化应激指标丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH），HE染色法观察肝组织形态学改变，Real-time PCR检测肝组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、血红蛋白加氧酶（HO-1）和转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2） mRNA的表达。结果与NC组比较，DDVT组和Lv-GFP组肝组织MDA、ALT、AST水平，HO-1和Nrf2 mRNA表达量明显升高，AChE、CAT、SOD、GSH水平和Keap1 mRNA表达量均明显降低（P<0.05）。与DDVT组比较，Lv-PON3组肝组织MDA、ALT、AST水平，Keap1 mRNA表达量降低，AChE、CAT、SOD和GSH水平均明显著升高，HO-1和Nrf2 mRNA表达量显著上升（P<0.05）。正常对照组肝细胞结构清晰，未出现肝细胞坏死和脂肪病变的情况，DDVT组和Lv-GFP组出现肝细胞坏死和脂肪变性等病理改变，Lv-PON3组肝脏病变组织肝细胞坏死和脂肪变性细胞数有一定的减少。结论 PON3可通过Keap1-Nrf2/HO-1途径缓解氧化应激反应，改善肝功能，对敌敌畏急性中毒小鼠肝损伤有一定的保护作用。

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