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当期目录

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    人类学
    中国汉族城市成年人身体肥胖指数值的纬度性分布
    李咏兰 郑连斌* 席焕久 宇克莉
    2015 (4):  572-576.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.022
    摘要 ( )  

    目的 探讨中国城市成年人身体肥胖指数(BAI)值随纬度的变化规律。 方法 采用随机抽样方法,2009年~2013年测量城市汉族10 451例(男性5048例,女性5403例)(共31个调查地区)的身高、臀围值,计算身体肥胖指数值。 结果 31个男性族群BAI均值在23.64~27.49之间,可分为3个等级:第1等级为BAI≥26.00,第2等级BAI在25.00~25.99之间,第3等级BAI<25.00;31个女性族群BAI均值在27.56~30.80之间,女性BAI也可分为3个等级:第1等级为BAI≥30.00,第2等级BAI在29.00~29.99之间,第3等级BAI<29.00。 结论 汉族31个城市族群臀围与纬度、身高与纬度、臀围与身高均呈正相关,BAI与臀围、BAI与纬度也均呈正相关,但BAI与身高不相关。

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    组织学胚胎学发育生物学
    小鼠精子发生过程中dysbindin-1的表达
    闫慧刘慧霞魏宗波郭蕊张涛 冯雅琴*
    2015 (4):  548-552.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.018
    摘要 ( )  

    目的 探讨精子发生过程中dysbindin-1的表达及dysbindin-1对精子顶体形态的影响。 方法 取生后7d、14d、21d、28d、35d和3月龄的雄性小鼠各3只,用免疫印迹法检测睾丸组织dysbindin-1的表达;以dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠为研究对象,收集附睾尾部精子,一部分制备精子涂片,HE染色显示精子形态,用异硫氰酸荧光素-豌豆凝集素(FITC-PSA)和抗精子蛋白56(sp56)单克隆抗体进行荧光染色显示顶体的结构;另一部分采用免疫印迹法检测精子中dysbindin-1的表达。
    结果 不同发育阶段小鼠睾丸组织及精子中均只有dysbindin-1A,无dysbindin-1C的表达;sdy小鼠的精子及顶体的形态未见明显异常。 结论 Dysbindin-1A表达于小鼠精子发生的不同时期,dysbindin-1A对精子形态维持不起关键作用。

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    神经生物学
    Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察
    时书勤 崔占军 鄢明超 穆小云 邓锦波* 殷明伟*
    2015 (4):  433-442.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.001
    摘要 ( )  

    目的 探讨小鼠室管膜下区(SVZ)的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流(RMS)切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响。方法 选用野生型(WT)小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况。结果 胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经干细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布。结论 室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍。

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    不同年龄双峰驼海马的形态学变化及其神经生长因子的表达
    张圆 谢丽 王长江 岳明霞 王德贵 邵宝平 王建林*
    2015 (4):  443-449.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.002
    摘要 ( )  

    目的 探讨胎驼、青年双峰驼及成年双峰驼海马不同区域内主要神经元形态特征变化及神经生长因子(NGF)的表达情况。 方法 应用常规石蜡切片Nissl染色及免疫组织化学方法,对胎驼、青年双峰驼和成年双峰驼海马CA1~CA3区锥体细胞、齿状回(DG)颗粒细胞的形态学变化进行研究,并观察了NGF的表达变化情况。
    结果 Nissl染色结果显示,从胎驼到青年双峰驼再到成年双峰驼,海马各区锥体细胞和颗粒细胞的体积增大、密度降低、细胞的核体比减小。NGF免疫组织化学结果表明,成年双峰驼海马锥体细胞中NGF的表达量显著高于胎驼和青年双峰驼(P<0.01),颗粒细胞中NGF的表达量逐渐增加。 结论 从胎驼到成年双峰驼,海马中的主要神经元不断成熟,从体积小且少有突起和分支的神经元发育成为体积较大、具有明显形态和功能的神经元。NGF在成年双峰驼海马神经元中表达量最高,表明NGF可调节已分化的神经元,使其形态和功能发生改变以促进成年双峰驼与海马相关的学习记忆功能的逐步完善。

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    组织学胚胎学发育生物学
    小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫发育的形态学特征
    杨艳萍景雅* 洪肖杨李海荣乔从进武珊珊
    2015 (4):  543-547.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.017
    摘要 ( )  

    目的 探讨小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫的形成与融合过程中的形态学特征。方法 选用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗磷酸化组蛋白H3(PHH3)抗体,对30只胚龄9~13d小鼠胚胎连续切片进行HE和免疫组织化学染色。另选15只胚龄12d、12.5d、13d小鼠胚胎心脏制作半薄切片和超薄切片进行观察。 结果 胚龄9d,心房与心室之间可见缩窄的房室管,房室管的心胶质较厚,但未见间充质细胞出现。胚龄10d,房室管心内膜垫开始形成,但连续切片观察显示背侧心内膜垫体积大于腹侧心内膜垫,且背侧心内膜垫对应的α-SMA、MHC阳性房室管心肌向心内膜垫内有明显延伸。心内膜垫内间充质细胞不表达α-SMA或PHH3。胚龄11~12d,背、腹侧心内膜垫变得对称,垫内间充质细胞增多,偶见α-SMA或PHH3阳性细胞。胚龄12~13d,两侧房室管心内膜垫彼此接近开始融合。透射电子显微镜下观察仅部分间充质细胞相邻细胞膜彼此相贴,局部形成细胞连接。胞质内可见粗面内质网、线粒体等细胞器,微丝较少。 结论 小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫形成时首先表现为内皮细胞由扁平变为立方形;两侧房室管心内膜垫形成不同步;房室管心内膜垫融合时间充质细胞局部形成细胞连接,胞质内微丝少,与流出道嵴融合时的超微结构特点不同。

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    孤雌胚胎干细胞来源的诱导多能干细胞的建立及对印记基因表达的影响
    单智焱 武玢 张玥 薛媛 吴嫣爽 沈星辉 雷蕾 刘忠华*
    2015 (4):  553-557.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.019
    摘要 ( )  

    目的 通过诱导多能干细胞(iPSCs)技术重编程孤雌胚胎干细胞,探讨iPSCs技术对孤雌胚胎干细胞的多能性及印记基因的影响。方法 从孤雌激活的囊胚中建立了孤雌胚胎干细胞;利用反转录病毒将多能性转录因子转入孤雌胚胎干细胞中,建立孤雌iPS细胞。 结果 建立的孤雌来源的iPS细胞体内外分化能力与孤雌胚胎干细胞的差别无显著性;Real-time PCR结果显示,孤雌iPS细胞母源印记基因的表达明显高于孤雌胚胎干细胞,父源印记基因表达下降,多能性基因表达升高。
    结论 iPSCs技术能影响基因的表达,尤其是印记基因,印记使其更接近于正常受精来源的胚胎干细胞中印记基因水平。

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    神经生物学
    鸵鸟眼球栉膜的形态学观察
    王凯 杨玉荣 冯永杰 焦喜兰 梁宏德*
    2015 (4):  450-454.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.003
    摘要 ( )  

    目的 观察和分析10只鸵鸟眼球栉膜的解剖学和组织学结构。 方法 采用常规石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色、Gordon-Sweet法、Van Gieson苦味酸酸性复红染色法,对健康的1 0月龄非洲黑颈鸵鸟眼球栉膜的形态学结构进行观察和分析。 结果 鸵鸟眼球栉膜位于视乳头部,呈椭圆锥体形浸入玻璃体内。体视显微镜下可见栉膜由三级栉片构成,位于中央的主栉片和主栉片延伸的次级栉片,以及少数次级栉片延伸出的三级栉片。有1个主栉片,次级栉片18~22个,少数次级栉片可以延伸出2~3个三级栉片。栉膜主要由疏松结缔组织构成,含有丰富的胶原纤维、血管及大量黑色素颗粒。 结论 鸵鸟眼球栉膜的解剖学和组织学结构是研究哺乳动物和人的视网膜血管功能的理想模型。

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    锌对疼痛后学习记忆障碍小鼠海马神经元P53蛋白表达的影响
    王月静 张海燕 廉洁 姚宏波 孙丽慧* 张萌
    2015 (4):  455-461.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.004
    摘要 ( )  

    目的 探讨锌对第5腰椎(L5)脊神经结扎横切所致神经病理性疼痛(NPP)模型的学习记忆功能障碍及海马组织中P53表达的影响。方法 成年小鼠(C57/BL6)48只, 随机分为3组(n=16 ),对照组(con),NPP组及高锌NPP组(Zn-NPP)。对照组仅暴露L5脊神经不结扎,NPP组施行L5脊神经左侧结扎横切(L L5-SNT)手术,Zn-NPP组施行左侧L5-SNT手术后饮用硫酸锌水溶液。3组术后第29 天进行Morris水迷宫实验测量小鼠空间学习记忆能力,水迷宫实验结束后,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用免疫组织化学及免疫印迹法检测各组P53表达。结果 Morris水迷宫实验中,NPP组 (21.03±12.08)m/s,Zn-NPP组(16.97±8.59)m/s及con组(8.74±3.61)m/s,隐藏平台潜伏期逐渐缩短(P< 0.05), 并穿过平台所在象限的时间及路径占总游泳时间和总路径的比例逐渐增加(P< 0.05)。流式细胞术检测结果显示,con组(1.88%),Zn-NPP(16.12%)及NPP组(33.17%)凋亡率逐渐增多(P< 0.05)。免疫组织化学结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53阳性表达吸光度值在CA1区分别为 27.42±7.08、37.52±10.58及53.31±9.26;CA3区分别为29.51±8.31、36.21±7.91及56.71±8.09。 免疫印迹结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53表达吸光度值分别为 0.12±1.01、0.37±1.13和0.86±1.22,吸光度值逐渐增多(P< 0.05)。 结论 锌可改善NPP后小鼠学习记忆能力。

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    组织学胚胎学发育生物学
    先天性肠无神经节细胞症患儿中血清维生素A及肠组织维甲酸受体α和HA117的表达特点
    罗媛圆滕银平刘行李力金先庆*
    2015 (4):  558-563.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.020
    摘要 ( )  

    目的 检测先天性肠无神经节细胞症(HD)患儿中血清维生素A及肠组织维甲酸受体α(RARα)、抗分化长链非编码RNA(LncRNA)HA117的表达特点,探讨其与HD发病机制的可能联系。方法 收取17例临床诊断为HD的患儿术前外周血及手术结肠组织标本,结肠组织由近端至远端分为3组:吻合口组、扩张段组和痉挛段组。检测血清维生素A浓度,采用Real-time PCR、免疫组织化学染色、Western blotting方法检测RARα及HA117在各组结肠组织的表达水平。结果 17例HD患儿均有不同程度维生素A缺乏,血清维生素A平均浓度为(0.73±0.05)μmol/L。在吻合口段,RARα在肌间神经丛可见棕黄色的阳性染色,而在痉挛段几乎未见阳性神经丛染色;在吻合口组、扩张段组和痉挛段组,RARα mRNA相对表达量依次为3.62 ± 1.12、1.81 ± 0.69、0.65 ± 0.32,与吻合口相比,痉挛段表达量降低(P<0.05, n=17);HA117 mRNA相对表达量依次为0.47 ± 0.15、1.25 ± 0.40、2.57 ± 0.70,与吻合口相比,痉挛段表达量增高(P<0.001, n=17);RARα蛋白相对表达量依次为1.16 ± 0.05、0.99 ± 0.05、0.88 ± 0.04,与吻合口相比,扩张段及痉挛段表达量降低(分别为P<0.05、P<0.001,n=17)。 结论 维生素A、RARα及HA117可能共同参与肠神经系统(ENS)的发育过程;其中,维生素A和RARα可能促进了ENS的正常分化发育,而高表达的HA117可能对抗了前者的促分化作用,阻碍了ENS正常分化发育过程,进而导致HD的发生。

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    解剖学
    大腿肌内侧群痉挛肌外神经阻滞靶点的定位
    胡双江 田旭峰 张永 杨胜波*
    2015 (4):  532-537.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.015
    摘要 ( )  

    目的 精确定位大腿肌内侧群痉挛肌外神经阻滞靶点的位置。 方法 设计经耻骨结节至股骨大转子外侧皮肤的连线为横向的H参考线,经耻骨结节至股骨内上髁水平的连线为纵向的L参考线。解剖暴露经甲醛固定的10具成人尸体的20侧闭孔神经及其肌支,涂抹硫酸钡于它们表面,烘干,X线摄片,PACS软件测量闭孔神经肌支肌外阻滞靶点在H线和L线上的百分位置。 结果 闭孔神经股薄肌支、长收肌支、短收肌支以及大收肌支在肌外的近侧运动点(P点)分别位于距耻骨结节外侧的大腿宽度(H线)的(21.48±1.80)%、(25.85±1.23)%、(28.07±1.65)%和(29.18±2.07)%处,位于距耻骨结节远侧的大腿长度(L线)的(8.83±1.01)%、(8.83±1.01)%、(7.57±0.63)%和(7.57±0.63)%处;远侧运动点(D点)分别位于距耻骨结节外侧大腿宽度(H线)的(16.9±1.33)%、(27.70±2.15)%、(31.18±2.18)%和(35.78±2.79)%处,位于距耻骨结节远侧大腿长度(L线)的(35.57±2.77)%、(26.9±1.96)%、(24.26±1.91)%和(28.04±2.17)%处。 结论 这些靶点的准确定位可提高大腿肌内侧群痉挛肌外神经靶点阻滞的安全性和有效性。

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    组织学胚胎学发育生物学
    黄芪(粗)多糖对麻黄素损伤小鼠肾组织结构和抗氧化物酶活性及Caspase-3蛋白表达的影响
    魏娉婷 李重阳 俞诗源*孟茹袁静
    2015 (4):  564-571.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.021
    摘要 ( )  

    目的 探讨黄芪(粗)多糖(APS)对麻黄素致损伤小鼠肾组织结构和抗氧化物酶活性的影响。方法 72只昆明小鼠分为空白对照组、实验对照组和黄芪(粗)多糖1、2组。实验对照组和黄芪(粗)多糖1、2组连续腹腔注射0.2 ml浓度为4.0g/L麻黄素溶液,黄芪(粗)多糖1、2组在腹腔注射麻黄素溶液1 h后,分别灌胃0.3 ml(12.5 g/L、25 g/L)APS溶液,空白对照组注射和灌胃等量的生理盐水。用比色法测定小鼠血浆尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)含量、肾组织超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,用显微镜观察小鼠肾组织结构的变化,用免疫组织化学法及Western blotting法检测肾组织Caspase-3蛋白表达的变化。结果 实验对照组小鼠血浆BUN及Cr含量高于空白对照组,肾组织SOD活性低于空白对照组,MDA含量高于空白对照组 (P<0.05或P<0.01),肾小球严重肿胀,肾小囊腔狭窄,肾小管上皮细胞有不同程度肿胀、坏死,肾组织Caspase-3蛋白表达高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。与实验对照组相比,APS组小鼠血浆BUN及Cr含量降低,肾组织SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),肾小球肿胀显著减轻,肾小囊腔明显可见,肾小管肿胀明显减轻,Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。 结论 APS能提高小鼠肾功能及肾组织细胞的抗氧化酶活性,能降低肾组织Caspase-3蛋白的表达,可有效减轻麻黄素对小鼠肾组织的损伤,对麻黄素致损伤小鼠有明显的保护效应。

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    解剖学
    颅脑正中矢状面磁共振成像对正常成人颅腔面积的测量
    刘霞 赵继平 段崇锋 李杨 隋庆兰*
    2015 (4):  538-542.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.016
    摘要 ( )  

    目的 于磁共振正中矢状位成像测量正常成年人颅腔面积,并归纳正常值范围,探讨其与年龄的相关性及性别差异。方法 从我院图片存档与通信系统(PACS)随机选取发育正常、无相关疾病成年人720例,按不同年龄段分为6组:20~29岁组、30~39岁组、40~49岁组、50~59岁组、60~ 69岁组、70~79岁组, 每组120例,男女各60例。于磁共振正中矢状位T1加权像上测量幕上面积、幕下面积、全颅面积及幕上/幕下面积比值(简称幕上下比),并对所测得数据进行统计学分析。结果 正常成年人幕上面积、全颅面积、幕上下比随着年龄增加略增大,与年龄成弱正相关、线性回归关系;幕下面积随着年龄增加略减小,与年龄成弱负相关、线性回归关系。男性与女性幕上面积、幕下面积、全颅面积、幕上下比差异均有显著性(相应t值分别为t=11.55;t=15.69;t=14.70;t=-4.13,P值均<0.05),除了幕上下比外,余各测量值的均值均为男性大于女性。 结论 正常成年人颅腔正中矢状位磁共振成像颅腔面积各测量值参考值范围具有一定的变化规律,可以作为临床评价颅腔容积的指标之一。

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    肿瘤生物学
    二维电泳和质谱技术鉴定肝细胞癌相关N-连接糖蛋白
    王明丽 韩大正 晁玮霞 刘瑞敏 赵云岗 张天 齐义军*
    2015 (4):  495-502.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.009
    摘要 ( )  

    目的 鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白。 方法 采用刀豆凝集素A(ConA)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱、生物信息学等技术鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证了转录调控肿瘤蛋白(TCTP)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)和膜联蛋白A2(annexin A2)在肝永生化及HCC细胞和HCC及癌旁组织中的表达规律,体外侵袭实验检测TCTP沉默后对SNU449的侵袭力影响。 结果 质谱、生物信息学等技术共鉴定出42个差异表达的蛋白质分子/异质体(HCC细胞中高、低表达的蛋白/异质体分别为14个、28个),代表32个蛋白质分子,其中的22个蛋白含有至少1个N糖基化位点(NetNGlyc 1.0预测)。这些差异表达的蛋白主要参与氧化还原内稳态维系、碳水化合物/能量代谢、糖酵解、抗凋亡等生物学过程。Western blotting检测表明,TCTP、EpCAM和annexin A2在6个肝癌细胞系PLC5、HepG2、SNU449、Huh7、HCC7721和SNU473及肝癌组织中表达显著升高,siRNA介导的TCTP沉默明显抑制了HCC细胞系SNU449的体外侵袭能力。 结论 TCTP、EpCAM和annexin可能参与了HCC发生发展过程,TCTP可能成为HCC靶向治疗的分子靶点之一。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    小鼠S180移植瘤毛细淋巴管超微结构随肿瘤生长的变化
    马楠 张丽男 王龙凯 张晓博 毕秀 高子彬*
    2015 (4):  503-508.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.010
    摘要 ( )  

    目的 观察小鼠肉瘤(S180)移植瘤发展过程中毛细淋巴管超微结构,探究随着荷瘤时间的延长,移植瘤内毛细淋巴管超微结构的变化。方法 腋下注射S180腹水型瘤株,建立S180荷瘤小鼠肉瘤模型,共15只,每组3只;采用透射电子显微镜技术观察小鼠S180移植瘤组织毛细淋巴管的超微结构,分析肿瘤组织毛细淋巴管超微结构随肿瘤生长的变化情况。结果 3d组标本观察发现,毛细淋巴管管壁结构完整,管壁可见锚丝与胶原纤维,毛细淋巴管内皮细胞胞质内可见各种结构正常的细胞器;5d组、7d组及9d组观察到随着荷瘤时间的延长,毛细淋巴管管壁断裂溶解情况越来越严重,可观察到的锚丝与胶原纤维数量越来越少,毛细淋巴管内皮细胞胞质内各种细胞器受损程度也越来越严重;11d组观察到毛细淋巴管管壁几乎全部破碎溶解,未观察到锚丝与胶原纤维,无法清晰辨认淋巴内皮细胞,未观察到细胞器。 结论 随着荷瘤时间的延长,肿瘤体积和重量呈增长趋势,毛细淋巴管管壁受损程度、淋巴内皮细胞胞质内细胞器的受损程度逐渐加重。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    人肝癌HepG2细胞小鼠荷瘤模型的建立及免疫耐受的探讨
    刘春佳 张星宇 单智焱 吴嫣爽 雷蕾*
    2015 (4):  509-513.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.011
    摘要 ( )  

    目的 建立正常免疫背景小鼠的人肝癌荷瘤模型,探讨人肿瘤细胞与胎鼠异种嵌合产生的免疫耐受。 方法 用绿色荧光蛋白(GFP)标记人肝癌细胞系HepG2,将GFP- HepG2细胞注射入孕16.5d的胎鼠腹腔内,观察新生小鼠腹腔内荷瘤情况及酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清人甲胎蛋白(AFP)含量; 小鼠成年后进行皮下成瘤实验及流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群变化。 结果 观察到经胎鼠腹腔注射的人GFP- HepG2细胞在新生鼠体内种植并生长于肝脏,分泌人甲胎蛋白;皮下荷瘤实验观察到经胎体注射GFP HepG2细胞诱导免疫耐受后,部分小鼠成年后仍可支持皮下HepG2细胞荷瘤,流式细胞术检测表明,诱导耐受后的小鼠免疫系统仍对人肝癌细胞保留有较弱的攻击。 结论 通过胎鼠腹腔注射人GFP- HepG2细胞可以建立人肝癌细胞小鼠荷瘤模型,部分荷瘤后的小鼠具有免疫耐受的能力。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    食管癌ECA109细胞中Survivin shRNA干扰对核因子κB表达的影响及调控机制
    李秀梅 陈艳 姜孝芳 李卉郭琼李惠武谌宏鸣*
    2015 (4):  514-520.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.012
    摘要 ( )  

    目的 探讨Survivin作为基因表达调控因子,对核因子κB(NF-κB)基因的转录及蛋白水平活性的影响及与NF-κB的调控关系。 方法 采用Survivin短发夹RNA(shRNA)干扰技术,脂质体转染食管癌ECA109细胞,检测Survivin沉默效果,选择最佳转染浓度;半定量RT-PCR检测Survivin shRNA干扰后食管癌ECA109细胞中NF-κB及其通路的上游调控因子核因子κB抑制蛋白α(IKKα)、IKKβ表达变化;Western blotting方法检测NF-κB蛋白的表达变化;流式细胞术检测干扰之后食管癌ECA109细胞增殖、凋亡指数的变化。 结果 Survivin shRNA干扰食管癌ECA109细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达明显下调;NF-κB mRNA表达变化无明显差异,但其蛋白磷酸化水平降低,NF-κB 上游因子IKKα、IKKβ mRNA表达下调;食管癌ECA109细胞凋亡明显增加,G2期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞周期受阻。 结论 Survivin通过在转录水平影响IKKα、IKKβ mRNA表达,调控NF-κB蛋白活化水平,提示Survivin在肿瘤信号调控网络中可作为一个新的基因表达调控因子。

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    紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用
    单长民* 孙业盈 李娟 王东 姚庆收 谭秀华 刘向勇
    2015 (4):  521-527.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.013
    摘要 ( )  

     目的 探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2 细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用。 方法 用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5) mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达。
    结果 紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2-ΔΔCT法分析发现,除了0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经 t 检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调(P<0.05)。 结论 上调的miR-224可能作用其靶基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3’UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响。

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    膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达和意义
    张扬许倩 陈龙 王小杰 田焕娜 李春辉李欣*
    2015 (4):  528-531.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.014
    摘要 ( )  

    目的 检测膜联蛋白A7(ANXA7)在胃癌组织中的表达改变,探讨胃癌的发生机制。 方法 收集人胃癌组织55例及正常胃组织25例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Western blotting法和Real-time PCR法分别于蛋白水平和基因转录水平检测ANXA7在胃癌组织和正常胃组织中的表达改变,并用免疫组织化学法对ANXA7在细胞中的定位和表达进行检测。 结果 ANXA7在胃癌中蛋白水平和转录水平的表达均显著增高,与正常组相比差异有显著性(P<0.05); ANXA7在胃癌细胞中定位于细胞质。 结论 膜联蛋白A7在胃癌中的表达增高有可能是胃癌发生的机制之一。

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    细胞和分子生物学
    油橄榄叶提取物干预海洛因依赖小鼠认知和氧化损伤及细胞凋亡的变化
    王昱* 王胜青 崔文辉 祁林林
    2015 (4):  462-470.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.005
    摘要 ( )  

    目的 探讨油橄榄叶提取物(OLE)对海洛因依赖小鼠认知和氧化损伤及细胞凋亡的影响。方法 150只小鼠皮下注射海洛因(10 mg/ kg)40 d,再分别给予不同剂量的(0、50、100、200 mg/kg)的OLE进行皮下注射治疗,用Morris水迷宫观察空间学习记忆能力的变化,用透射电子显微镜观察海马细胞结构的改变,用比色法检测小鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GPx)、还原型谷胱甘肽(GSH)的活性及丙二醛(MDA)的含量,免疫组织化学和Western blotting检测海马Bax蛋白和Caspase-3的表达。 结果 模型组小鼠海马神经元核膜不规则,细胞器结构异常或空泡化,小鼠逃避潜伏期和逃避的距离高于正常组,在目标象限探索的时间及游泳距离占总距离的百分比低于正常组(P<0.01),海马组织SOD、CAT、GPx、GSH活性低于正常组,MDA含量高于正常组(P<0.01),海马组织Bax蛋白和caspase-3的表达高于正常组(P<0.01)。OLE治疗组小鼠海马神经元损害程度减轻,小鼠逃避潜伏期和逃避的距离缩短,在目标象限探索的时间及游泳距离占总距离的百分比延长,海马组织SOD、CAT、GPx、GSH活性又升高,MDA含量及Bax蛋白和Caspase-3的表达又显著降低(P<0.05或P<0.01)。 结论 OLE对海洛因诱导的脑损伤的神经保护与其具有抗氧化能力。抑制细胞凋亡的特性有一定的关系。

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    干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用
    孙艳艳 邓晓惠 晁岚* 杨阳 程来洋 杜天奇 王静
    2015 (4):  471-479.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.006
    摘要 ( )  

    目的 探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法 收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting 和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用pEGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA 转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-BeWo 共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting 和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3(STAT3)、肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-BeWo 共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。 结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。

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    天冬氨酸及赖氨酸2~10肽单链和双链的合成与毒性
    赵茜怡 徐霆 李梦华闫文娟王书佩徐存拴*
    2015 (4):  480-487.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.007
    摘要 ( )  

    目的 探讨同种氨基酸形成多肽的毒性和应用前景。方法 用固相合成法合成天冬氨酸和赖氨酸的2~10肽单链与双链化合物,通过小鼠尾静脉将这些化合物注射到小鼠肝脏内,观察它们对小鼠的致死作用(LD50)。结果 当天冬氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.15、0.1、0.09、0.03、0.0065、0.03、0.034、0.035和0.04 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。当赖氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.28、0.1、0.047、0.0225、0.0028、0.00166、0.0015、0.0011和0.00075 mol /L时,小鼠的死亡率达到50%。当天冬氨酸赖氨酸双链2~10肽的浓度依次得到0.5、0.05、0.017、0.014、0.009、0.006、0.004、0.004、0.004、0.004 mol /L时,小鼠的死亡率达到50%。 结论 单链多肽的毒性大于双链多肽。在2~6肽范围内,天冬氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;相反,在7~10肽范围内,随着氨基酸数目的增加毒性逐渐降低。在2~10肽范围内,赖氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加。在2~6肽范围内,天冬氨酸赖氨酸双链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;但在7~10肽范围内,其毒性相似。

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    新生大鼠多器官成纤维细胞nanog蛋白的表达差异
    鲁召辉 常玉巧 郭志坤* 赵国安 李琼 李辞霞
    2015 (4):  488-494.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.008
    摘要 ( )  

    目的 探讨新生大鼠心、肝、脾、肺、肾和皮肤中成纤维细胞nanog蛋白表达差异及其意义。方法 用免疫组织化学、免疫荧光和体外细胞培养技术,对成纤维细胞进行nanog蛋白和波形蛋白(vimentin)标记,检测并比较新生大鼠不同器官中成纤维细胞nanog蛋白和vimentin表达及共表达特征。 结果 新生大鼠心、肝、脾、肺、肾和皮肤6种器官中均有nanog蛋白和vimentin表达,在每个器官中均有少数成纤维细胞共表达这两种蛋白,共表达率分别为心(10.07±0.77)%、肝(9.97±3.70)%、脾(11.23±2.98)%、肺(15.07±2.87)%、肾(11.75±2.76)%、皮肤(16.14±1.28)%,其中皮肤和肺的共表达率高于心、肝、脾、肾(P<0.05)。 结论 共表达nanog蛋白和vimentin的成纤维细胞可能更具有干细胞样特性;新生大鼠皮肤和肺的成纤维细胞可能更具有组织损伤修复潜能。

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