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当期目录

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    人类学
    鄂尔多斯蒙古族头面部的人体测量学
    李咏兰 郑连斌* 旺庆
    2015 (5):  684-689.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.019
    摘要 ( )  

    目的 探讨鄂尔多斯蒙古族头面部形态学特征。方法 参照《人体测量方法》有关规定,在内蒙古鄂尔多斯市鄂托克旗测量了鄂尔多斯蒙古族336例(男142例,女194例)的头面部的6项观察指标和20项测量指标,对蒙古族11个族群头面部指标均数进行了聚类分析。结果 鄂尔多斯蒙古族上眼睑多有皱褶,多有蒙古褶,鼻根高度多为中等,颧骨突出,唇薄,眼褐。鄂尔多斯蒙古族男性与女性为圆头型、中头型、高头型、中鼻型。形态面指数男性为阔面型,女性为中面型。男性、女性聚类分析结果均显示,鄂尔多斯蒙古族头面部特征与巴尔虎人、图瓦人最为接近。 结论 鄂尔多斯蒙古族具有蒙古人种北亚类型头面部特征。

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    解剖学
    离体肝脏标本标准解剖位置的复原
    戴毅* 陈洪 赵国刚 杨汉峰 邓世三
    2015 (5):  646-648.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.012
    摘要 ( )  

    目的 从计算机断层扫描(CT)和磁共振成像 (MRI)断面影像中获得肝脏标准解剖学体位的一些信息,用于对离体肝脏恢复其解剖位置。 方法 通过测量100例上腹部CT和MRI图像中下腔静脉与门静脉在横断面、矢状面和冠状面的相互角度来了解肝脏标准解剖体位的解剖学特征。包括横断面上,门静脉囊部到下腔静脉中心之间的连线与水平线(桌面)之间的角度;矢状面上,下腔静脉与桌面之间的角度;冠状面上,下腔静脉与体正中线之间的角度。从而获得关于肝脏标准解剖体位的三维数据。 结果 横断面上平均角度为左侧角(79.1±9.2)°;矢状面上平均角度为(7.3±5.1)°;冠状面上平均角度为(6.1±4.3)°。 结论 通过应用这些解剖学特征可以将离体的肝脏标本恢复到大致标准的解剖体位。为正确认识肝内结构相互关系奠定基础。

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    细胞和分子生物学
    人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对延缓细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB信号轴的关系
    周玥* 王亚平 王建伟 丁继超
    2015 (5):  623-628.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.008
    摘要 ( )  

    目的 探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB(SIRT6/NF-κB)信号轴的关系。 方法 免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠干细胞抗原阳性(Sca1+)HSC/HPC,连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。60Co γ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组,照射对照组;衰老模型组;Rg1治疗衰老组;Rg1预防衰老组。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Rg1体内调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。实时定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。 结果 连续移植后受体鼠Sca1+HSC/HPC出现细胞衰老特征,随移植代数的增加,Sca1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1预防衰老组受体鼠Sca1+ HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高;SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显。结论 Rg1可能通过调控SIRT6/NF-κB信号轴发挥其对抗连续移植过程中Sca1+ HSC/HPC衰老的作用。

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    新生大鼠心肌telocytes在体外培养状态下的分裂方式
    常玉巧 李辞霞 郭志坤* 李和* 甘黎 牛艳菲
    2015 (5):  629-633.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.009
    摘要 ( )  

    目的 探讨体外培养新生大鼠心肌telocytes的分裂方式。 方法 采用0.1%胶原酶I/0.125%胰蛋白酶联合消化法分离培养新生大鼠心肌telocytes,活细胞工作站动态捕捉和苏木素染色检测telocytes的分裂方式。 结果 酶联合消化法培养新生大鼠心肌telocytes纯度高、活力好,增殖迅速。无丝分裂时,胞核变大,以出芽方式生长,形成哑铃状细胞核,核芽逐渐拉伸并与母细胞分离。有丝分裂前中期,染色质缩短变粗为染色体,整齐地排列在赤道板处;分裂末期,染色体到达两极,子核已初步形成;胞质分裂期,胞质逐步拉开,形成两个子细胞。在有丝分裂不同时期,心肌telocytes均保持其原有的形态特征。 结论 体外培养心肌telocytes增殖时有丝分裂和无丝分裂两种方式并存。

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    技术方法
    甲基丙烯酸羟乙酯塑料包埋切片技术在小鼠胎脑组织学分析中的应用
    李帅 陈宇琛 张雪茜 童仙杰 宋晓彬 范春娥 陈华群*
    2015 (5):  690-693.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.020
    摘要 ( )  

    目的 探索塑料包埋切片法在小鼠胎脑组织学分析中的应用。 方法 取胚胎期13.5d(E13.5)小鼠,4% 多聚甲醛4℃固定过夜,分离胎鼠头部,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)塑料包埋组织并切片;对切片进行HE 染色。 结果 与石蜡包埋相比,采用HEMA塑料包埋的方法进行胎鼠脑组织学分析,形态结构保存较完整、HE染色效果较清晰。 结论 利用塑料包埋技术进行小鼠胎脑组织学分析,优于石蜡包埋方法。

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    猪胆总管脱细胞支架的制备及组织学评价
    李文春* 李静 张红梅 王汉琴
    2015 (5):  694-698.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.021
    摘要 ( )  

    目的 用不同的脱细胞方法对猪胆总管进行处理,比较脱细胞前后的组织学变化,筛选适宜的脱细胞方法,为组织工程胆管支架材料的应用提供理论依据。
    方法 30例猪胆总管随机分为5组:对照组(A组):0.05% 胰蛋白酶+核酸酶(B组):0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)+核酸酶(C组):1.0% Triton X-100+核酸酶(D组):1.0% Triton X-100+0.1% SDS +核酸酶(E组)。通过HE染色光学显微镜下观察脱细胞基质的组织结构和细胞残留情况;用紫外分光光度法检测脱细胞基质的DNA含量,计算脱细胞率。结果 脱细胞B组有少量细胞残留,纤维有损伤;脱细胞C组、D组、E组的细胞均被去除,纤维无明显损伤。A组的DNA含量为(71.24 ± 2.56)μg /100 mg。B、C、D、E4个脱细胞组的DNA含量与A组的差异有统计学意义(F =15.29, P<0.01),均有明显的脱细胞效果(P<0.01)。B组的脱细胞率为77.03%,比C组、D组、E组的脱细胞效果稍差(P<0.05),E组的脱细胞率高达99.03%。 结论 应用1.0% Triton X-100+0.1% SDS +核酸酶的脱细胞效果好,能更好地降低胆总管的免疫原性,是一种比较理想的猪胆总管脱细胞方法。

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    肿瘤生物学
    转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路
    张立美 战军 张宏权 薛丽香*
    2015 (5):  634-640.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.010
    摘要 ( )  

    目的 探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法 构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系, 在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,Tree View和DAVID生物信息数据库(DAVID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路,绘制热图(heatmap)。 结果 BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物 E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物 N-cadherin, Twist1、Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。 结论 HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和黏附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。

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    人类学
    甘肃天祝藏族自治县居民血脂水平调查
    白静雅 海向军 何进全 汪玉堂 马斌 樊洁 何烨*
    2015 (5):  679-683.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.018
    摘要 ( )  

    目的 了解甘肃天祝藏族自治县居民血脂水平及血脂异常发生率。 方法 采用整群随机抽样方法,选择长期居住该县境内的18~74岁汉族和藏族居民479人为研究对象。按年龄分为:18~34岁、35~44岁、45~54岁、55~64岁、65岁以上5个年龄组。所有调查对象均进行血脂等指标测定,并根据2007年中国成人血脂异常防治指南血脂测定标准对血脂异常与否进行判断。 结果 1.该地区居民血脂异常发生率为42.17%,血脂异常类型主要以高TG、低HDL–C为主。2.血脂异常发生率以45~54岁组最高。包括男女性高TC血症、高TG血症、高LDL- C血症均为人群最高发生率。3.血脂异常率表现为男性随年龄增长持续降低,女性随年龄增长总体呈上升趋势。45岁以上女性血脂水平及血脂异常发生率增长速度均快于男性。4.汉族和藏族血脂异常发生率以及4项血脂指标异常率比较均无差异。 结论 甘肃天祝藏族自治县居民具有较高的血脂异常发病率,不同性别的血脂异常发病率和类型有较大差异。

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    综述
    不同分化阶段诱导性多能干细胞移植实验研究进展
    李君 杜潇 吴嫣爽 雷蕾*
    2015 (5):  699-703.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.022
    摘要 ( )  
    诱导性多能干细胞(iPSCs)是由动物体细胞重编程得到的具有胚胎干细胞特性的全能干细胞。近年来,随着多能干细胞诱导技术的不断优化以及体外分化技术的飞速发展,多种分化状态的多能干细胞被用于移植实验。我们结合最新研究进展,阐述各种分化阶段诱导性多能干细胞用于动物移植治疗的优缺点,以及最新移植方法所存在的问题。  
    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    体外诱导骨髓间充质干细胞成肝(样)细胞的研究进展
    代克强 丁一樊晋宇徐存拴*
    2015 (5):  704-709.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.023
    摘要 ( )  

    肝病已成为世界上发病率和死亡率最高的疾病之一。目前有望治疗晚期重症肝病的方法有原位肝移植、肝细胞移植、生物人工肝等,但这些方法都面临着肝或肝细胞源紧缺的问题。如何能够获得体外增殖的、可用于移植疗法的肝细胞资源成为研究的要点。骨髓间充质干细胞(BMSCs)既具有自我更新的能力,也具有在合适的微环境里多系横向分化的潜能,在体外可以被诱导分化为肝(样)细胞,理论上可提供丰富的肝细胞,BMSCs成为了细胞治疗的研究热门。我们简要综述了体外诱导BMSCs向肝样细胞(HLCs)分化的研究成果和最新进展,总结了各种诱导方法的优势以及存在的问题,并对该研究领域进行了小结与展望。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    小鼠孤雌胚胎及孤雌胚胎干细胞中印记基因的表达
    宋司航 张梓卉 廖辰 雷蕾*
    2015 (5):  710-714.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.024
    摘要 ( )  

    小鼠孤雌胚胎体内发育最多不能超过10.5d,发育失败的主要原因是胚外组织发育缺陷和印记基因表达的异常。随着小鼠孤雌二倍体和单倍体胚胎干细胞的建系成功,不仅能作为研究印记基因的理想模型,还能够作为种子细胞应用于细胞治疗,拓宽了小鼠孤雌生殖的研究领域和再生医学应用范围。孤雌胚胎聚合作为一种简便易行的技术手段,能够显著提高孤雌胚胎干细胞的建系效率,还能促使异质胚胎间的印记基因相互补偿从而更加趋近于正常受精的胚胎干细胞。我们在文中主要阐释了小鼠孤雌胚胎、孤雌聚合胚胎、孤雌二倍体胚胎干细胞、孤雌单倍体胚胎、孤雌聚合胚胎干细胞中印记基因的表达。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    斑马鱼视网膜再生研究进展
    张书强 刘东 徐绘*
    2015 (5):  715-719.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.025
    摘要 ( )  

    哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力。与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力。斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力。研究表明,斑马鱼视网膜再生的细胞来源是Müller细胞。近年来,关于斑马鱼视网膜Müller细胞去分化及其增殖的分子机制和信号通路的研究取得了许多新的进展。我们就斑马鱼视网膜再生的研究历史、损伤模型和再生细胞来源以及调控的分子机制等做一综述。

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    人类学
    太行山猕猴指(趾)长比性差
    赵晓进* 田华香 胡海洋 胡凤霞
    2015 (5):  673-678.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.017
    摘要 ( )  

    目的 研究太行山猕猴指(趾)长比性差大小和分布。 方法 测量成年雄性猕猴左右侧指骨100根、趾骨120根和成年雌性猕猴左右侧指骨250根、趾骨250根的长度,根据5根指骨和5根趾骨长度的可能组合得到相应的20个长度比。数据用SPSS 20.0统计学软件进行分析。结果 5根指骨和5根趾骨的绝对长度变量性差显著(P<0.01); 10个指长比没有明显的性差(P>0.05);10个趾长比中有6个性差显著(P<0.05或P<0.01);性差的方向是雄性大于雌性,性差最大的趾长比出现在低比率排序的1D∶5D(P<0.01);猕猴指长比性差模式与其他一些非人灵长类不同。 结论 在控制了其他一些可能影响的因素(种群差异、系统演化、运动类型和行走姿势等)之后,猕猴的指长比主要受到3个因素的影响,社会行为、种内雌性同性竞争水平和种内雄性同性竞争水平。长度比的模式可能受到出生前性激素的影响。

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    肿瘤生物学
    胡桃醌诱导HeLa细胞凋亡的机制
    张巍 张若文 朱文赫 李妍 罗军 赵行宇 徐俊杰 姜艳霞 吕士杰*
    2015 (5):  641-645.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.011
    摘要 ( )  

    目的 探讨胡桃醌对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的机制,及其相关的信号转导通路。方法 选取处于对数生长期的HeLa细胞将其分为空白对照组和30μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对不同时间点HeLa细胞的抑制作用;Hoechst 33258试剂盒,流式细胞仪测定胡桃醌对不同时间点HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax 和Caspase-3, 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路中AKt及pAkt的表达。 结果 MTT实验显示,与对照组比较,各时间点HeLa细胞具有抑制作用,且差异显著均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);Hoechst 33258检测表明,30μmol/L胡桃醌处理细胞4,8,12 h后可出现明显的细胞核典型凋亡细胞形态;细胞凋亡检测表明,30μmol/L胡桃醌培养不同时间后,与对照组相比早期凋亡率明显增高;Western blotting检测显示,与正常对照组相比,30μmol/L胡桃醌处理细胞12h后,HeLa细胞Bcl-2,pAkt蛋白的表达明显降低,而Bax、Cleave-Caspase-3,Akt 蛋白表达明显升高。 结论 胡桃醌通过抑制PI3K/Akt通路,进而促进HeLa细胞凋亡。

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    组织学胚胎学发育生物学
    骨形态发生蛋白-2在小鼠胚胎心流出道发育中的作用
    屈旭宽 洪肖杨 景雅 杨艳萍 许智慧 崔慧林 乔从进 李海荣*
    2015 (5):  649-654.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.013
    摘要 ( )  

    目的 探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在小鼠胚胎心流出道发育过程中的作用。 方法 对胚龄9d(E9) ~E15(各胚龄取3~7只)小鼠心连续石蜡切片,用抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)抗体、抗胰岛素增强子结合蛋白(ISL-1)抗体、抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体、抗BMP-2抗体进行免疫组织化学染色。结果 E9,流出道心胶质内无细胞,心肌增殖活性低,BMP-2弱表达于流出道心肌、心内膜及心包腔背侧壁。E9~11,流出道增长,心包腔背侧壁ISL-1阳性细胞至流出道远端分化为心肌细胞后增殖逐渐减弱。E10~11,流出道嵴内间充质细胞逐渐增加,可见BMP-2、PCNA阳性细胞;流出道BMP-2表达逐渐增强达高峰,向两端延伸逐渐减弱,动脉端可及心包反折处。E12,流出道缩短,BMP-2表达减弱。E13~15,流出道隔逐渐肌化,BMP-2在心脏近大血管部心肌呈较弱表达。E10~13,流出道远段心肌呈低增殖活性,近段及右心室心肌增殖成小梁致右心室形成及扩大。结论 BMP-2诱导第二生心区(SHF)细胞分化为心肌细胞添加至心动脉端,参与心流出道嵴的发育。BMP-2抑制流出道心肌增殖,流出道近段BMP2表达减弱重启了心肌细胞增殖,致右心室形成及流出道缩短。低水平的BMP2可能诱导流出道隔间充质细胞向心肌分化。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    少突胶质细胞转录因子和神经钙黏附蛋白在人胚胎脊髓发育阶段的表达
    张泳 张居适 陈健尔 刘学红*
    2015 (5):  655-659. 
    摘要 ( )  

    目的 探讨少突胶质细胞转录因子(Olig)和神经钙黏附蛋白(N-cadherin)在人胚胎脊髓发育阶段的分布规律及其表达意义。方法 应用免疫组织化学法检测第2、3、4月龄段,共17例人胚胎,脊髓中Olig和N-cadherin的表达和分布状况。应用One-Way ANOVA和 LSD-t 统计学方法,分析第2~4个月龄段人胚胎脊髓组织内N-cadherin和Olig蛋白的各自阳性表达强度值及Olig蛋白的阳性细胞表达数量。 结果 第2~4个月龄段,随着胎龄的增大,N-cadherin在脊髓组织的阳性表达强度值逐渐增大,其值分别是117.77±6.72、129.63±9.44 和 133.35±8.15,差异有统计学意义(P<0.01);Olig阳性表达强度值呈先升高再降低,其值分别是69.98±24.59、85.10±9.19、71.62±11.81,差异有统计学意义(P<0.05);Olig阳性表达细胞数量逐渐增多,其值分别是9.38±7.80、15.55±7.30、25.59±14.54,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 N-cadherin和Olig在第2~4个月龄段人胚胎脊髓组织内均有阳性表达,提示其表达分布与脊髓组织内神经细胞和神经胶质细胞的分化、发育关系密切。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    大鼠比目鱼肌肌纤维总数、横截面积及其内慢肌纤维和快肌纤维横截面积与年龄相关的变化
    王灵战* 王立群 孟壮志 王晓平 张丽伟 李迪 刘明晶
    2015 (5):  660-666.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.015
    摘要 ( )  

    目的 探讨SD大鼠比目鱼肌的形态学特征随年龄增长的变化情况。方法 4、18、25和30月龄雄性SD大鼠比目鱼肌各5块,通过HE染色、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测和免疫组织化学方法,观测比目鱼肌纤维形态、数目、肌肉横截面积及其内慢肌纤维和快肌纤维分布特征、横截面积与年龄相关的变化。
    结果 比目鱼肌内肌纤维形状随年龄增长变得不规则,并伴以肌纤维劈裂和簇聚。30月龄较4月龄大鼠的比目鱼肌纤维总数减少(P<0.05),而且其与其余年龄组大鼠的肌肉横截面积比较亦明显减小(P<0.01)。仅4月龄和25月龄大鼠比目鱼肌内慢肌纤维横截面积相比无差别(P>0.05),而快肌纤维横截面积则表现为18月龄和25月龄比较无差异(P>0.05)。结论 30月龄SD大鼠比目鱼肌纤维总数、肌肉横截面积及其内慢肌纤维和快肌纤维横截面积与其他年龄组大鼠相比差异显著,提示在衰老后期骨骼肌功能可能会发生明显变化。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    神经生物学
    低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡
    张军峰 史利利 张力 赵朝华 杨蓬勃 张建水 刘勇 徐曦*
    2015 (5):  581-586.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.001
    摘要 ( )  

    目的 在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。 方法 用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。 结果 成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。 结论 在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。

    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2在恶性脑肿瘤中的普遍标志性表达
    高维 董士业 潘飞燕 刘丹慧*
    2015 (5):  587-590.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.002
    摘要 ( )  

    目的 检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2)在恶性脑肿瘤中的表达。 方法 使用免疫组织化学法检测了NADK2在75例恶性脑肿瘤中的表达。结果 本实验检测了NADK2在75例恶性脑肿瘤中的表达情况,包括55例星形细胞瘤、13例少突神经细胞瘤、3例髓母细胞瘤和4例室管膜瘤,74例样本中NADK2的表达都明显高于正常对照组织。对免疫组织化学结果进行吸光度分析,比较NADK2在不同肿瘤类型和不同分级的脑肿瘤中的表达,结果表明,NADK2在恶性脑肿瘤中的表达与肿瘤类型和分级无关。结论 高表达NADK2是恶性脑肿瘤的一个普遍特征。

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    鸡胚发育过程中音猬因子超表达对Pax家族基因表达的影响
    李晗杨慈清乔梁张必超林俊堂*
    2015 (5):  667-672.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.016
    摘要 ( )  

    目的 探讨鸡胚发育过程中,音猬因子(Shh)基因在脊髓中超表达后对配对框(Pax)基因家族Pax3、Pax6以及Pax7蛋白表达的影响。 方法 在鸡胚龄2.5~3.0d(E2.5~E3)时,实验组利用鸡胚脊髓活体电转基因技术将携带Shh基因的质粒和携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒共转入鸡胚脊髓,对照组则只转入报告基因质粒。E4时取材,每组至少取3例,冷冻切片后采用原位杂交技术检测Shh基因的mRNA表达水平,利用荧光免疫技术检测Shh在鸡胚脊髓中超表达后对Pax3,Pax6以及Pax7蛋白表达水平的影响,并将对照组及实验组中3种基因在脊髓两侧的表达量进行统计学分析。 结果 原位杂交结果表明,E4时Shh的mRNA主要表达在脊髓底板和脊索,实验组结果显示,利用鸡胚脊髓活体电转技术成功建立了Shh超表达模型。对照组中荧光免疫结果表明,Pax3主要表达于脊髓翼板、生肌节、背根以及背根神经节;Pax6主要表达于跨越翼板和基板的脊髓中间部位;Pax7则主要均匀表达于翼板、顶板和生肌节。Shh超表达后,脊髓转染侧与未转染侧相比Pax3、Pax6以及Pax7的表达量差异极显著(P<0.01),这3种基因在脊髓中的表达均被抑制。 结论 在鸡胚发育过程中,Pax家族Pax3、Pax6以及Pax7 3种基因在鸡胚脊髓中具有不同的表达模式,Shh超表达后对其均具有明显的抑制作用,显示这3种Pax基因受Shh信号通路调控。

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    生长抑素阳性神经元在大鼠纹状体的形态分布
    张文君 俞明远 王利利 滕可导 马云飞*
    2015 (5):  591-595.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.003
    摘要 ( )  

    目的 探讨成年大鼠纹状体内生长抑素(SOM)阳性神经元的形态分布。方法 选取6只SD大鼠,应用免疫细胞化学染色ABC法观察脑纹状体SOM神经元的分布特征。 结果 在大鼠纹状体内SOM免疫反应阳性神经元呈棕黄色,为强阳性或中等阳性染色,免疫反应阳性物质主要存在于胞质和突起。SOM阳性神经元在纹状体呈散在分布,胞体中等大小[(111.81±21.42)μm2],多为卵圆形、椭圆型或多边形。背侧[(113.52±22.36)μm2]SOM阳性神经元胞体面积大于腹侧[(110.14±20.59)μm2],外侧[(126.23±23.45)μm2]大于内侧[(97.26±23.63)μm2]。腹内侧区SOM阳性细胞数量百分比最多[(28.34±3.20)%],其次是背内侧区[(27.64±3.52)%]和腹外侧区[(2498±317)%],背外侧区最少[(1904±312)%]。 结论 SOM神经元在纹状体结构各区分布的大小及数量不完全相同。

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    含种子细胞的丝素组织工程神经移植物修复大鼠脊髓损伤
    刘晓东 薛成斌 鞠前前 杨晓华 秦建兵 田美玲 吕广明*
    2015 (5):  596-601.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.004
    摘要 ( )  

    目的 探讨体外构建含种子细胞的蚕丝丝素组织工程神经移植物(TENGs)的方法,评价其对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法 分离大鼠皮肤前体细胞并向施万细胞诱导分化,S-100免疫荧光染色鉴定。将皮肤前体细胞诱导分化的施万细胞(SKP-SCs)作为种子细胞,联合蚕丝丝素神经导管和纤维支架共培养。共培养7d后将蚕丝丝素TENGs置入大鼠背侧T8~T10半横断损伤的脊髓中,于术后不同时间点利用BBB评分观察行为学的变化,术后8周取材,切片,免疫荧光染色观察脊髓损伤修复情况以及种子细胞的存活情况。 结果 相差显微镜下体外培养的SKP-SCs大部分细胞形态呈双极或3极,免疫荧光染色显示,SKP-SCs呈S-100阳性,将SKP-SCs与蚕丝丝素支架材料共培养,蚕丝丝素支架表面均匀贴附大量的细胞,生长状态良好。将该移植物移植入大鼠T8~T10半横断损伤脊髓处,术后BBB评分显示,从4周起至8周均优于对照组,且结果具有统计学差异;术后8周时取材切片仍能观察到大鼠体内有大量种子细胞存活。 结论 含种子细胞的蚕丝丝素组织工程神经移植物对于修复大鼠脊髓损伤具有一定的促进作用。

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    穴位埋线对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响
    唐中生 吴春朋 罗亚非* 谢高宇 寇云芳
    2015 (5):  602-608.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.005
    摘要 ( )  

    目的 观察穴位埋线疗法对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制。 方法 采用改良Pulsinelli’s 4血管阻断法建立VD大鼠模型,随机数表法分为VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,并设置假手术组作为对照。两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗。Morris 水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力后,取含海马的脑组织,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,原位杂交法检测其Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达,观察并比较各组大鼠海马神经细胞凋亡、蛋白表达的变化。 结果 VD模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡细胞、Bcl-2 mRNA 表达降低、Bax mRNA 的表达增高,与假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。VD模型组表现出明显的学习记忆障碍,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.01);与VD模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01),CA1区凋亡细胞明显减少(P<0.01),可见一定数量的Bcl-2 mRNA阳性细胞表达,而Bax mRNA阳性细胞表达较少。 结论 穴位埋线可通过上调VD大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA的表达、下调Bax mRNA 的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力。

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    甘油二酯激酶ζ、蛋白激酶Cδ和Tis21在发育中大鼠脑的表达和定位
    李佳 牛宝贝 刘慧霞 李海荣 乔从进 崔慧林*
    2015 (5):  609-615.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.006
    摘要 ( )  

     目的 探讨甘油二酯激酶ζ(DGKζ)、蛋白激酶Cδ(PKCδ)和Tis21在大鼠胚胎脑的时空表达模式以及与脑发育的关系。方法 胚龄(E)9.5~E18.5大鼠胚胎各5只,连续切片用于免疫组织化学方法检测DGKζ、p-PKCδ和Tis21在大鼠胚胎脑的表达;22只胚龄E11.5、E12.5、E14.5、E16.5和E18.5大鼠胚胎用于Western blotting,检测DGKζ、磷酸化PKCδ(p-PKCδ)、PKCδ和Tis21在大鼠胚胎脑组织的表达。 结果 免疫组织化学显示,于E9.5 p-PKCδ和Tis21在神经沟神经上皮呈阳性表达,DGKζ为阴性;E10.5~E11.5,DGKζ、p-PKCδ和Tis21在脑泡壁均呈阳性表达;在E12.5三者均表达于端脑、间脑、中脑腹侧和脑桥处神经上皮,而中脑背侧、峡部和小脑原基仅DGKζ呈阳性表达,p-PKCδ和Tis21呈阴性;于E13.5三者沿海马、隔、苍白球及嗅脑呈阳性分布,在新皮质呈阴性,p-PKCδ和Tis21在峡部和小脑原基出现阳性表达;于E14.5 DGKζ表达延伸到新皮质,在脑的各个区域呈现出全阳性。而p-PKCδ和Tis21表达仅延伸到中脑顶盖,在新皮质仍为阴性;于E15.5 p-PKCδ和Tis21在新皮质出现阳性表达, 在脑的各个区域均呈阳性;E16.5~E18.5,三者在小脑和脑桥表达范围缩小;DGKζ和p-PKCδ可表达在神经上皮细胞的胞质,或胞质和细胞核。Western blotting显示,DGKζ和Tis21在E11.5~E14.5表达逐渐增多,E12.5较E11.5显著增多,在E16.5和E18.5逐渐下降;p-PKCδ/PKCδ显示PKCδ活性变化趋势与DGKζ表达趋势一致。结论 DGKζ、p-PKCδ和Tis21时空表达与脑发育模式一致,DGKζ和p-PKCδ在神经上皮细胞的亚细胞分布提示它们主要通过DGKζ/Tis21 和 PKCδ/Tis21途径参与脑的发育。 

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    细胞和分子生物学
    猪脂肪源间充质干细胞诱导成脂分化及Krüppel样因子2的表达
    刘京霞 李方正 朴英姬 姜忠玲 宋学雄*
    2015 (5):  616-622.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.05.007
    摘要 ( )  

    目的 旨在阐明猪脂肪源间充质干细胞(AMSCs)在诱导成脂分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)的表达模式。方法 采用I型胶原酶消化法处理猪脂肪组织,经原代和传代培养分离、纯化和扩增AMSCs,用流式细胞仪检测AMSCs纯度,在倒置显微镜下用形态学和油红O染色法检测AMSCs的成脂分化,用实时定量PCR检测KLF2的表达模式,并与过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPARγ2)的表达进行了比较。结果 分离、纯化的AMSCs,其间充质干细胞表面抗原CD29、CD44 和 CD105表达量分别为91.7%、95.1%和95.6%,而造血干细胞表面抗原CD34表达量仅为3.39%;在诱导分化2d后,个别细胞质中出现小脂滴,且含脂滴的细胞数量和脂滴量随诱导时间的延长而增加,在诱导分化第18天成脂分化率达48.2%;在诱导分化第2天、第8天和第16天,KLF2的表达量分别为1.84±0.206、1.07±0.072和0.83±0.095, 而PPARγ2 mRNA的表达量分别为3.06±0.542、13.22±0.5736和15.11±1.073。结论 获得纯度较高的AMSCs,具有良好的成脂分化潜能,KLF2的表达量在成脂分化早期的前脂肪细胞阶段增加,成脂分化开始后逐步减少,KLF2作为脂肪分化负调控转录因子而发挥作用。 

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