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2022年, 53卷, 1期
刊出日期：2022-02-06 上一期    下一期
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技术方法

神经生物学

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利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9 基因敲除小鼠 程全成 樊婧 刘怀存 丁慧如 方璇 王建伟 陈春花 张卫光 2022 (1):  126-131.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.018 摘要 ( )   PDF(5078KB) ( )   目的  利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因，构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。   方法  根据CRISPR/Cas9靶点设计原则，在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域，综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2，前期在其两边设计7个小向导RNA（sgRNA）靶点，选择合适靶点，将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后，继而提供10只野生型小鼠（雌雄各5只）进行繁育，以期得到纯合子AQP-9-/-小鼠。   结果  前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上，选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚，移植60枚，得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定，最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。   结论  利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9-/-小鼠。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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正丁醇联合松节油替代二甲苯用于石蜡包埋 于静 江思瑜 田俊杰 任立群 许露丹 李宝群 吴晓光 2022 (1):  132-136.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.019 摘要 ( )   PDF(25199KB) ( )   目的  寻找一种能够替代二甲苯透明剂的组织石蜡包埋方法。 方法  使用正丁醇和松节油的混合物替代常规石蜡包埋过程中无水乙醇、二甲苯的作用，收取卷茎蓼干预的多发性脑梗模型大鼠的脑、肾、胃、肝、十二指肠组织进行石蜡包埋，最终根据石蜡切片的效果、HE染色以及免疫组织化学结果对这种新型脱水程序做出评价。   结果  正丁醇和松节油的混合物可以替代常规石蜡包埋程序中无水乙醇的脱水、二甲苯的透明作用。经正丁醇、松节油混合物处理后的组织切片流畅，组织无变脆、变硬；HE染色后，新型脱水处理组织的细胞核、细胞质分明，组织的着色度、色泽、透明度与常规脱水程序无差异；通过大鼠不同组织做免疫组织化学染色，经对比结果与常规包埋组织免疫组织化学染色无差异。   结论  正丁醇联合松节油用于组织脱水既能够避免二甲苯对人的毒性作用，还可以减少无水酒精过度脱水对组织的破坏。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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CD73对体外大鼠心肌细胞增殖和功能的影响 王琰 赵育洁 李志营 王前 郭志坤 2022 (1):  28-34.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.004 摘要 ( )   PDF(7856KB) ( )   目的  探讨 CD73 对大鼠心肌细胞（CMs）增殖和功能的影响。   方法  体外培养原代大鼠 CMs 和大鼠心肌细胞系 H9C2，构建慢病毒 CD73 过表达载体和空载病毒组，分别转染 CMs 和 H9C2。实验分组：CD73 过表达组（OE组）和阴性对照组（NC组），即CMs-OE组和CMs-NC组；H9C2-OE组和H9C2-NC组，每组各5只。Real-time PCR 法检测转染病毒后各组细胞 CD73 基因水平表达情况；MTT 法检测细胞增殖能力变化；无损伤心肌细胞功能分析仪检测 CMs 细胞增殖曲线、倍增时间和搏动变化。   结果  慢病毒转染 CMs 和 H9C2 72 h 后，过表达组 CD73 mRNA 水平明显高于对照组（P<0.05）；CMs和 H9C2 转染后3～4 d的增殖能力为OE组大于NC组（P<0.05）；CMs 和 H9C2 细胞增殖曲线均显示 OE 组高于 NC 组，CMs 和 H9C2 倍增时间为 OE 组低于 NC 组（P<0.05）；CMs转染后72 h显示OE组细胞搏动率高于NC组， OE组转录因子T-同源盒基因5（TBX5）表达和血管内皮生长因子（VEGF）的分泌高于NC组，而缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及肝病坏死因子α（TNF-α）的分泌低于NC组。   结论  CD73可促进 CMs 和 H9C2 的增殖，促进 CMs 搏动及TBX5表达和VEGF分泌，抑制HIF-α和TNF-α的分泌。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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低氧预处理通过激活低氧诱导因子1α增强老年人骨髓间充质干细胞促血管新生能力#br# #br# 宋慧芳 谈佳音 刘阳 张卫国 郭蕊 2022 (1):  35-41.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.005 摘要 ( )   PDF(9515KB) ( )   目的  探讨低氧预处理对老年人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）促血管新生能力的影响，为改善老年患者自体干细胞移植治疗缺血性心肌损伤疗效提供支持。   方法  老年hBMSCs经过低氧预处理后，倒置相差显微镜下摄片观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表面标志物，并进行成骨、成脂诱导分化检测其分化潜能。随后收集青年hBMSCs常氧培养基（norCM），老年hBMSCs常氧和低氧培养基（hypoCM），分别为norCM-young、norCM-old和hypoCM-old 3组条件培养基，未加干细胞的等体积培养基为阴性对照（control）组。各组条件培养基分别处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs），用CCK-8法检测细胞存活率，用管状结构形成实验检测体外血管新生能力。BCA法检测各组条件培养基总蛋白含量，Western blotting技术检测细胞中及条件培养基中低氧诱导因子1α(HIF-1α)含量。   结果  低氧预处理对老年hBMSCs形态、表面标志物及分化潜能影响不显著（P>0.05，n≥3）。HypoCM-old组与norCM-old组相比，低氧-复氧培养条件下HUVECs的存活率显著提高（P<0.05，n=5）， HUVECs细胞管状结构形成能力也显著提高（P<0.01，n=5）。HypoCM-old组总蛋白量显著高于norCM-old组（P<0.05，n=3），hypoCM-old组 hBMSCs中HIF-1α表达量显著高于norCM-old 组（P<0.05，n=3），同时hypoCM-old组培养基中HIF-1α的含量显著高于norCM-old组（P<0.01，n=3）。   结论  低氧预处理的老年hBMSCs通过旁分泌促进体外HUVECs存活和管状结构的形成，而其促进作用与HIF-1α的活化相关。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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肩峰折角的解剖学分型及临床意义 周安平 严杭 陈永洪 谢东波 张玉科 郭世涛 王建学 2022 (1):  92-95.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.012 摘要 ( )   PDF(1954KB) ( )   目的  探讨基于CT三维重建的肩峰折角形态学分型及测量分析。   方法  收集278例成年人CT三维重建肩胛骨形态数据，分析不同类型间测量数据的差异，明确其统计学意义，总结其形态学特点进行肩峰折角分型，探讨其在肩峰下撞击综合征诊治中的意义。    结果  本研究将肩峰折角分为3型 (C型、L型和双角型)。其中L型最多，占48.56%，其次为C型，双角型最少；双角型a点肩峰厚度大于其余两型 (P<0.05)；双角型的肩峰倾斜角大于C型 (P<0.05)及L型 (P<0.05)。   结论  肩峰折角的分型与解剖学参数具有明显差异，且差异具有统计学意义，这对明确肩峰下撞击综合征的病因及其临床诊治具有一定的指导意义。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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中国西南人群腹主动脉及其分支的解剖学与影像学特征 刘建 徐利军 周燕平 李春燕 金开元 周播江 2022 (1):  96-102.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.013 摘要 ( )   PDF(3606KB) ( )   目的  探讨西南人群中腹主动脉及其分支的正常参考值，为临床腹主动脉瘤的诊治提供依据。   方法   通过对20例尸体的腹主动脉及其分支进行长度、直径、血管间的夹角等测量。同时，选择4个城市人群共计300例无明显病变者行腹部CT血管造影（CTA），从影像学测量腹主动脉及分支的长度、直径、血管间的夹角等数据。   结果  腹主动脉显示率为100%，其平均长度为（12.96±0.81）cm，腹主动脉的直径在肾动脉平面（Ⅰ）、肠系膜下动脉平面（Ⅱ）及第4腰椎下缘平面（Ⅲ）的平均值分别为（1.93±0.28）cm、（1.55±0.23）cm、（1.61±0.19）cm；影像上平均值分别为（2.17±0.42）cm、（1.81±0.40）cm、（1.99±0.53）cm；髂总动脉的显示率为100%，左右髂总动脉间的夹角为（59.80±4.66）°，末端直径分别为（1.16±0.33）cm和（1.12±0.11）cm；腹腔干尸体显示率为100%，其平均长度是（1.61±0.27）cm，在尸体上的平均直径是（0.78±0.71）cm，影像上是（0.88±0.31）cm；肾动脉显示率为100%，左肾动脉平均长度为（2.58±0.50）cm，右侧为（4.26±0.65）cm，左侧肾动脉起始处的平均直径为（0.55±0.24）cm，右侧为（0.62±0.20）cm；肠系膜上动脉的显示率为100%，其在尸体上平均长度为（4.56±0.29）cm，影像测量值为（4.93±0.84）cm， 与腹主动脉间夹角为（38.05±5.99）°；肠系膜下动脉的显示率为100%，在尸体上平均长度为（6.57±0.79）cm，影像测量值为（6.70±0.76）cm，与腹主动脉间夹角为（73.79±9.62）°，起始处直径为（0.48±0.29）cm。  结论  解剖和CTA显示了腹主动脉的脏支，测量了中国西南人群腹主动脉及其脏支的正常参考值，CTA对显示腹主动脉及其分支腔内、腔外和血管壁的病变有特殊的优势，可为患者术前提供血管的解剖数据。 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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肩锁关节形态学及组织结构特点 周日 谢小肖 王霜 任士友 张文涛 2022 (1):  103-107.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.014 摘要 ( )   PDF(2643KB) ( )   目的  探讨肩锁关节形态学及组织结构特点。  方法  对27具成人新鲜尸体进行解剖学分析，观察肩锁关节形态，测量相关骨性结构、韧带参数，并将标本随机分为A、B两组，A组保留肩锁韧带和喙锁韧带，B组仅保留肩锁韧带，比较两组之间承受拉力的差别。   结果  锥状韧带止点中点到锁骨远端距离（42.68±6.34）mm，止点宽度（16.97±4.28）mm，中心点厚度为(5.39±0.34）mm；斜方韧带止点中点到锁骨远端度距离（20.35±4.18）mm，止点宽度（10.35±1.31）mm，中心点厚度为（5.19±0.342）mm；喙突基底底部到锁骨表面的垂直平均距离为30.75 mm，喙锁间隙平均距离为12.02 mm；锥韧带中轴长度为（15.68±3.30）mm，角度（117.25±10.80）°，而斜方韧带中轴长度为（9.67±2.25）mm，角度（75.42±11.37）°，锥状韧带和斜方韧带始点距离（8.96±3.00）mm，止点距离（13.09±3.50）mm；A组拉力平均值（610.04±51.24）N高于B组拉力平均值（560.41±44.63）N（P<0.05）。   结论  在行锁骨远端切除术时，锁骨远端切除应控制在10～30 mm之间，在喙突下方上钻孔时深度尽量不超过42 mm，肩锁关节脱位时重建喙锁韧带具有解剖学及生物力学基础。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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内蒙古与新疆达斡尔族成人皮脂发育比较 隋杰 李欣 温有锋 张文虔 李强 于婷 2022 (1):  120-125.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.017 摘要 ( )   PDF(908KB) ( )   目的  探讨造成内蒙古和新疆达斡尔族成人皮下脂肪发育差异的主要原因以及环境对皮下脂肪发育的影响。   方法  采用随机抽样方法调查了544例（新疆304，内蒙古240）达斡尔族成人9项身体围度值与6项皮褶厚度值，对新疆和内蒙古达斡尔族身体围度、皮褶厚度以及肥胖指标进行分析。   结果  新疆和内蒙古达斡尔族除大腿围外，其余8项身体围度、肱三头肌皮褶、肩胛下皮褶等2项皮褶厚度、皮-弗指数、体脂率、身体质量指数（BMI）等3项肥胖指数间差异有统计学意义。对应分析显示，与南方地区相比，北方地区皮下脂肪发育较强。   结论   内蒙古达斡尔族比新疆脂肪发育较强，肌肉发育较弱，两地超重及肥胖问题均较严重，建议加强锻炼注意饮食，低温、缺乏体育锻炼、经济和医疗水平低以及不健康的饮食习惯会导致皮下脂肪增厚。 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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广西毛南族群体体成分与血脂和血尿酸的相关性 罗笑薇 冯航 邓琼英 龚继春 龚健古 徐林 2022 (1):  114-119.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.016 摘要 ( )   PDF(816KB) ( )   目的  了解毛南族成年人的体成分与血脂、血尿酸的相关关系，探讨体成分变化对血脂、血尿酸的影响。   方法  广西毛南族自治县毛南族村寨毛南族成人584人（男237，女347），年龄20～80岁。用人体测高仪测量身高；用ANITA MC-180 仪测量体成分；用日立7600仪测量血脂和血尿酸。所得数据用SPSS 20.0统计学软件进行分析。   结果  毛南族男性年龄、身高、体重、去脂体重、肌肉量、推定骨量、身体水分、蛋白质、细胞外液、细胞内液和腰臀比大于女性（P<0.05）；而脂肪量、体脂肪率、皮下脂肪含量小于女性 (P<0.01)。毛南族高尿酸血症和血脂异常患病率分别为13.9%和28.4%，其中男性高尿酸血症和血脂异常患病率大于女性（P<0.05）。血脂异常患者男性体重、体质指数、去脂体重、脂肪量、肌肉量、推定骨量、蛋白质、细胞外液、体脂肪率、内脏脂肪含量、皮下脂肪含量、腰臀比高于血脂正常组（P<0.05）；女性年龄、体质指数、脂肪量、体脂肪率、内脏脂肪含量、腰臀比高于正常组。高尿酸血症组男性体重、去脂体重、推定骨量、身体水分、细胞外液高于正常组（P<0.05）；女性年龄、体重、体质指数、脂肪量、细胞外液、体脂肪率、内脏脂肪含量、皮下脂肪含量、腰臀比高于正常组。   结论  广西毛南族成人的血脂异常、高尿酸血症检出率男性均高于女性。广西毛南族正常成人的体成分含量与高脂血症、高尿酸血症患者之间均存在明显差异。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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缝隙连接蛋白26和30在大鼠2型糖尿病性耳聋模型中的表达 栾峰 张燕 陈旭真 王娜 张璞 曲雁 2022 (1):  108-113.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.015 摘要 ( )   PDF(10821KB) ( )   目的  探讨缝隙连接蛋白（Cx）26和Cx30在大鼠2型糖尿病耳蜗中的表达，及两者在2型糖尿病性耳聋发病机制中的作用。  方法  60只Wistar大鼠随机分为实验组（40只）和对照组（20只）；实验组以腹腔注射10 mg/L 链脲佐菌素建立2型糖尿病模型，检测模型成功前及成功后第1、2、3、4、5月的听性脑干反应（ABR），采用HE染色观察两组耳蜗形态变化；免疫荧光、Western blotting检测Cx26和Cx30在两组大鼠耳蜗的表达变化。   结果  实验组在模型成功后第1、2、3、4、5月Click-ABR 60dBSPL Ⅲ波、Ⅴ波潜伏期和 Ⅰ～Ⅲ、Ⅰ～Ⅴ波间期较对照组延长（P<0.05）；实验组螺旋韧带和螺旋神经节中细胞数量少于对照组（P<0.05）；实验组Cx26和Cx30在成模后2、3、4、5月表达较对照组减少（P<0.05），且随着时间延长，两种蛋白表达逐渐降低。   结论  Cx26和Cx30在大鼠2型糖尿病模型耳蜗中表达减少，且与听力损害出现时间相同。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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MiR-515-5p通过调控硫酸软骨素蛋白聚糖4表达对卵巢癌A2780细胞增殖和转移的影响及其机制 江红 黄艳丽 邢辉 汪黎明 郭红 2022 (1):  42-49.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.006 摘要 ( )   PDF(11747KB) ( )   目的  探讨miR-515-5p对硫酸软骨素蛋白聚糖4（CSPG4）的靶向调控作用，以及对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。   方法  通过生物信息学工具预测miR-515-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blotting法检测65例卵巢癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-515-5p和CSPG4的表达。将A2780细胞分为miR-NC组、miR-515-5p组、si-NC组、si-CSPG4组、miR-515-5p+pcDNA组和miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组。MTT法检测细胞增殖活力，Transwell检测细胞迁移和侵袭数，Western blotting检测细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、P21、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-515-5p对CSPG4基因的调控作用。   结果  生物信息学分析显示，CSPG4是miR-515-5p的潜在靶基因之一。与癌旁组织相比，卵巢癌组织miR-515-5p的表达较低，CSPG4的表达较高（P<0.05）。与miR-NC组、miR-515-5p组相比，A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低，P21蛋白的表达较高，细胞活力较低，细胞迁移和侵袭数较少（P<0.05）。与si-NC组相比，si-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低，P21蛋白的表达较高，细胞活力较低，细胞迁移和侵袭数较少（P<0.05）。与miR-515-5p+pcDNA组相比，miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较高，P21蛋白的表达较低，细胞活力较高，细胞迁移和侵袭数较多（P<0.05）。MiR-515-5p靶向并负性调控CSPG4表达。   结论  MiR-515-5p通过靶向CSPG4可抑制卵巢癌细胞A2780增殖和转移。 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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WAS-like 蛋白在肠癌组织中低表达并抑制人结肠癌细胞的干性 李宏丹 杨成 2022 (1):  50-59.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.007 摘要 ( )   PDF(15745KB) ( )   目的  探讨WAS-like 蛋白(WASL)在肠癌的表达情况，以及对肠癌细胞干性的影响。  方法  运用UALCAN数据库预测WASL蛋白的表达量与肠癌组织中的表达及其与肠癌患者的性别、临床分期、淋巴结转移的关系；组织免疫荧光和细胞免疫荧光染色验证WASL在肠癌组织和细胞中的表达。Western blotting检测人正常结直肠黏膜细胞（FHC细胞）与肠癌细胞HCT-116和SW-480中WASL蛋白的表达情况及WASL的转染效率；应用干细胞球（sphere）形成实验和集落形成实验检测转染后，WASL对肠癌细胞中癌干细胞（CSCs）的影响；Real-time PCR检测CSCs相关基因八聚体结合转录因子4（OCT4），性别决定区Y框蛋白2（SOX2），Lin28，Krüppel样因子（KLF）的表达；采用缺氧，血清剥夺和对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药实验检测WASL对肠癌细胞干性的影响。   结果  WASL在肠癌组织中mRNA和蛋白均低表达（P<0.05）；WASL在肠癌组织中低表达，在HCT-116和SW-480中，WASL的表达明显弱于FHC细胞；成功构建稳定WASL表达的肠癌细胞系；Real-time PCR显示，WASL抑制了CDCs相关基因OCT4，SOX2，Lin28，Krüppel样因子（KLF）的表达；干细胞球形成和集落形成实验发现，WASL抑制肠癌细胞形成干细胞球形成和集落形成；缺氧实验和血清剥夺实验发现WASL上调后，能够抑制肠癌对缺氧和缺血清耐受，5-FU耐药实验显示，WASL也能抑制肠癌细胞对5-FU的耐受。   结论  WASL蛋白在肠癌组织和肠癌细胞中低表达，并与肠癌的不良预后有关，WASL蛋白的过表达能够抑制肠癌细胞的干性。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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基于癌基因组图谱数据挖掘分析CC亚族趋化因子配体20在食管癌中的表达及临床意义 秦波 王正洋 殷凡响 闫丹 朱珠 2022 (1):  60-65.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.008 摘要 ( )   PDF(9503KB) ( )   目的  探讨CC亚族趋化因子配体20（CCL20）在食管癌中的表达及对病程进展和预后的影响。   方法  利用癌基因组图谱 (TCGA)、UALCAN、GEO等相关数据库分析CCL20基因在食管癌组织与癌旁组织中的表达差异，通过Kaplan-Meier模型探讨CCL20表达水平与预后的关联性；分析CCL20与肥胖、甲基化等之间的关系；最后通过mRNA、蛋白水平，分析CCL20在食管癌组织和癌旁组织的表达差异。   结果  CCL20在食管癌尤其是腺癌类型中高表达，高表达CCL20患者生存率明显降低；CCL20的表达量与食管癌患者肥胖程度成正比、与其甲基化程度成反比；食管癌组织中CCL20的表达量显著增加。   结论  CCL20在食管癌组织中高表达，且CCL20高表达与患者的生存预后成显著负相关。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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低氧化应激下肿瘤坏死因子α过表达对牙髓干细胞生物学性能的影响 李伟 杨赣军 彭建安 胡红梅 周星辰 2022 (1):  66-74.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.009 摘要 ( )   PDF(6681KB) ( )   目的  探讨低氧化应激下肿瘤坏死因子α(TNF-α)过表达对牙髓干细胞(DPSCs)生物学性能的影响。   方法  实验分组为常氧DPSCs组、常氧空载转染组、常氧TNF-α过表达组、DPSCs 3% O2组、空载DPSCs 3% O2组、TNF-α过表达3% O2组。牙髓干细胞复苏并培养，然后将慢病毒TNF-α 转染细胞置于37 ℃、CO2培养箱培养， ELISA法检测各组细胞TNF-α的表达水平，RT-PCR检测TNF-α过表达氧化应激作用下的表达，Real-time PCR、Western blotting检测氧化应激作用下人DPSCs碱性磷酸酶（ALP）、牙本质涎磷蛋白（DSPP）表达和MTT检测各组细胞TNF-α转染后细胞增殖情况。   结果  Lentivirus-TNF-α转染细胞10 h 后，即可在倒置荧光显微镜下观察到绿色荧光信号，TNF-α过表达可以使低氧环境中牙髓干细胞增殖能力增强，且低氧的微环境可以增加TNF-α的表达，使DPSCs可以进一步的表达TNF-α，而且TNF-α过表达3% O2 时，Western blotting和Real-time PCR检测都表明DPSCs中ALP、DSPP表达差异具有显著性（P<0.05）。   结论  低氧微环境中DPSCs过表达TNF-α可以同时提高增殖效率和较高的分化效果。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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慢病毒短发夹RNA介导的多形性腺瘤基因样蛋白2沉默对肝癌细胞MHCC97-L增殖、迁移及侵袭的影响#br# #br# 赵克昌 王伟 杨金煜 冯鹏才 吴世乐 2022 (1):  75-81.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.010 摘要 ( )   PDF(2158KB) ( )   目的  探讨慢病毒短发夹RNA（shRNA）介导的多形性腺瘤基因样蛋白2（PLAGL2）沉默对肝癌细胞恶性行为的影响及其机制。  方法  Real-time PCR与Western blotting分别检测肝癌组织及癌旁组织中PLAGL2的表达水平；体外培养肝癌细胞MHCC97-L，构建慢病毒载体质粒PLAGL2-shRNA与对照NC-shRNA，转染MHCC97-L细胞，采用嘌呤霉素筛选稳转株；CCK-8、Transwell小室实验检测沉默PLAGL2后MHCC97-L细胞的增殖活力以及迁移和侵袭数量；Western blotting检测p-PI3K和p-Akt蛋白表达。用PI3K/Akt信号通路激活剂处理MHCC97-L细胞，检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。   结果  肝癌组织中PLAGL2 表达水平显著升高（P＜0.05）；9株MHCC97-L细胞转染PLAGL2-shRNA可明显降低PLAGL2表达水平，同时，细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱（P＜0.05），p-PI3K、p-Akt 表达受抑制（P＜0.05）；PI3K/Akt激活剂可明显逆转上述现象。   结论  慢病毒shRNA载体介导的PLAGL2沉默，可显著抑制肝癌细胞恶性行为，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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虾青素提高血管性痴呆小鼠学习记忆能力 张明 马卫成 曹伟娟 邹佳灵 朱宁伟 2022 (1):  5-10.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.001 摘要 ( )   PDF(1845KB) ( )   目的  探讨腹腔给药虾青素对于血管性痴呆（VaD）小鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。   方法  采用双侧颈总动脉夹闭法建立小鼠VaD模型后随机分成假手术组、模型组、虾青素低剂量组及虾青素高剂量组，分别给予相应形式的药物治疗。Morris水迷宫观察各组小鼠的学习记忆及空间探索能力，尼氏染色、免疫组织化学染色、Western blotting及ELISA检测小鼠脑神经元的病理形态、脑内β-淀粉样肽42（Aβ42）蛋白表达及炎症相关因子白细胞介素（IL）-4及IL-6含量。   结果  模型组小鼠第4天及第5天的平均逃避潜伏期较假手术组显著增加（P<0.05），平台穿越次数及停留时间显著下降（P<0.05）；尼氏染色显示，模型组小鼠海马区神经元固缩，排列紊乱，神经元数量较假手术组明显减少；经过不同剂量虾青素治疗干预后，小鼠的第4天和第5天平均逃避潜伏期较模型组显著下降（P<0.05），平台穿越次数及停留时间显著延长（P<0.05），神经元排列层次分明，尼氏染色阳性细胞较模型组明显增加，效果呈剂量依赖性。另外，免疫组织化学染色、Western blotting及ELISA检测显示，不同剂量虾青素干预组较模型组脑内Aβ42蛋白及IL-6含量显著下降（P<0.05），IL-4含量显著增加（P<0.05）。   结论  虾青素能够降低脑内神经毒性蛋白Aβ42的表达以及抑制脑内炎症反应，从而发挥神经元保护作用，改善小鼠的学习记忆能力。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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18α-甘草次酸通过抗氧化作用促进成年小鼠室管膜下区神经干细胞增殖 刘雪芹 牛晓洁 王必慧 王婷玉 杨静 陆利 2022 (1):  11-18.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.002 摘要 ( )   PDF(7430KB) ( )   目的  探讨18α-甘草次酸（18α-GA）对成年小鼠室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）增殖的影响及其机制。  方法  100只6月龄BALB/c小鼠随机平均分为18α-GA组（腹腔注射18α-GA 40 mg/kg两个月，以DMSO为溶解介质）和DMSO对照组（腹腔注射含等体积DMSO溶解介质的PBS溶液），每组50只，其中15只用于在体实验，其余35只小鼠断头取脑，分离培养SVZ区NSCs。采用Ki-67染色、成球实验、BrdU掺入实验及CCK-8实验检测SVZ区NSCs增殖活力，二氢乙啶（DHE）染色等方法检测活性氧簇(ROS）及超氧化物歧化酶1（SOD1）水平， Real-time PCR及Western blotting检测SVZ区NSCs 的核因子E2相关因子2 (Nrf2)表达。   结果  在体实验结果显示，腹腔注射18α-GA后，小鼠SVZ区Ki-67阳性细胞数较DMSO对照组明显增多，ROS水平较DMSO对照组明显下降，而SOD1在mRNA和蛋白水平均明显升高，分别是对照组的（3.17±0.073）倍和（2.12±0.02）倍（P<0.05和P<0.001）。细胞实验结果表明，18α-GA组小鼠SVZ区的NSCs成球速度快，数量多，其中直径在40～60 μm和≥60μm的神经球数量分别是DMSO对照组的2.1倍和4倍（P<0.001）；18α-GA组小鼠SVZ区的NSCs活力明显提高（P<0.001），BrdU阳性率是DMSO对照组的（1.75±0.17）倍（P<0.01）；18α-GA组小鼠SVZ区NSCs的ROS水平较DMSO对照组下降18.91%±4.33%（P<0.05），而SOD1在mRNA和蛋白水平均明显升高（P<0.05和 P<0.01）。此外，腹腔注射18α-GA后小鼠SVZ区及其NSCs中Nrf2的mRNA和蛋白水平均高于对照组（P<0.01和 P<0.05）。  结论  在体给予18α-GA可提高成年NSCs的SOD1活性，减少细胞内ROS堆积，维持和改善成年小鼠SVZ区NSCs的增殖潜能。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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MiR-26a和异黏蛋白的关系及在裸鼠体内荷瘤实验的验证 杨晨晨 范宇琴 2022 (1):  82-91.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.011 摘要 ( )   PDF(6739KB) ( )   目的  探讨miR-26a和异黏蛋白（MTDH）的关系。   方法  采用免疫组织化学SP染色法检测86例食管癌病理组织芯片中MTDH的表达，采用原位杂交检测miR-26a的表达，分析两者表达的相关性。通过生物信息学预测软件Targetscan Human7.2预测MTDH在miR-26a序列上的结合片段。采用荧光素酶报告实验验证MTDH与miR-26a的靶向调控关系。用慢病毒干扰和过表达的食管癌细胞系进行裸鼠皮下注射，观察瘤块的形成，采用免疫组织化学染色法和原位杂交法检测各组瘤体中MTDH和miR-26a的表达，分析其关系。  结果  MiR-26a在食管癌组织中的表达明显低于配对癌旁正常食管组织，而MTDH在食管癌组织中的表达明显高于配对癌旁正常食管组织。MiR-26a的表达与患者病理分级（P<0.05）、N分期（P<0.05)、肿瘤体积（P<0.01）有关。MTDH在食管癌中的表达与N分期（P<0.05）、分化程度（P<0.01）有关。采用Targetscan Human7.2生物信息学软件预测发现，MTDH基因中含有1个hsa-miR-26a的靶序列。荧光素酶报告基因实验也证实了miR-26a与MTDH的靶向调控关系。MiR-26a在KYSE-450细胞中表达最高，在Eca109细胞中表达量最低， 本研究采用KYSE-450细胞系进行miR-26a干扰实验的裸鼠实验，采用Eca109细胞系进行过表达实验。过表达miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下，成瘤后miR26a的表达升高，MTDH的表达降低。干扰miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下，成瘤后瘤块中miR-26a的表达降低，MTDH表达升高。   结论  MiR-26a能抑制食管癌细胞MTDH表达，在体外和体内实验，均可验证miR-26a与MTDH的靶向调控关系，miR-26a可能通过MTDH通路在食管癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色。 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

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人参皂苷Rb1促进小鼠坐骨神经损伤修复的作用及机制研究 姚远 杜静怡 周文娟 2022 (1):  19-27.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.003 摘要 ( )   PDF(11037KB) ( )   目的  构建小鼠坐骨神经损伤（SNI）模型，探讨人参皂苷Rb1对小鼠坐骨神经损伤修复的促进作用及机制。   方法  选取成年雄性昆明小鼠78只，随机分为假手术组（26只）、模型组（26只）、治疗组（26只）。模型制作采用钳夹损伤法，假手术组仅游离坐骨神经。模型制作后30 min，治疗组腹腔注射10 mg/kg人参皂苷Rb1，模型组与假手术组给予同等体积的生理盐水。采用坐骨神经功能指数（SFI）对小鼠坐骨神经功能进行追踪评价；利用HE染色及生长相关蛋白43(GAP43)免疫荧光染色检测损伤14 d后坐骨神经再生修复情况；利用透射电子显微镜观察损伤节段髓鞘的结构改变。损伤后14 d，检测脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)mRNA水平的表达变化。模型制作后3 d、7 d，利用Ki67、S100β免疫荧光染色检测施万细胞的增殖、迁移能力；利用Real-time PCR检测炎症相关因子以及施万细胞激活相关转录因子mRNA表达水平；通过Western blotting对Sox10在蛋白水平的变化进行验证。   结果  治疗组SFI评分高于模型组小鼠，神经近端、远端HE染色较均一。透射电子显微镜提示，治疗组髓鞘结构、厚度较模型组明显改善，髓鞘内神经纤维排列较为整齐。免疫荧光染色结果显示，治疗组坐骨神经GAP43+轴突伸长明显优于模型组，BDNF、NGF等营养因子表达升高。进一步检测发现，给予Rb1后损伤节段附近Ki67+细胞增殖、S100β+施万细胞迁移明显增多。Real-time PCR结果显示，治疗组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β mRNA表达水平明显下降，施万细胞激活相关转录因子表达水平上升。   结论  10 mg/kg Rb1能降低再生组织环境中炎症因子表达水平，增加BDNF、NGF等营养因子的表达水平，促进施万细胞激活，从而促进小鼠坐骨神经损伤后的神经再生。  参考文献 | 相关文章 | 计量指标