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    综述
    踝蛋白与记忆机械基础理论的研究进展 
    陈荟竹 方璇 陶昶煜 张卫光
    2023 (2):  249-254.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.019
    摘要 ( )   PDF(1109KB) ( )  
    衰老、缺氧等诱发的记忆缺失极其普遍,因此,探索记忆的产生、存储和检索等机制对于日常生活及临床工作均具重大意义。而记忆的存储及检索或与计算机有相似之处,我们整理了记忆的机械基础-网格编码理论的研究进展。某些疾病(如阿尔茨海默病)或病理状态(如衰老、缺氧)导致的记忆缺失可能与机械敏感蛋白质踝蛋白的折叠异常有关。踝蛋白可以通过结构域状态的改变,以二进制的形式存储或更新机械力微小变化的信息,并引发神经元内配体的重新分配等化学过程,从而动态调节突触活动,将记忆以网格编码的二进制格式储存在大脑中。
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    人类学
    贵州苗族与湘西苗族体成分分析
    廉祎 李咏兰 于会新
    2023 (2):  231-237.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.016
    摘要 ( )   PDF(3267KB) ( )  
    目的  探讨地区差异对苗族体成分的影响。    方法  采用生物电阻抗法对贵州苗族357例成人(男162例,女195例)和湘西苗族471例成人(男210例,女261例)进行了17项体成分指标的测量,对所得数据进行体成分与年龄的相关分析、单因素方差分析及主成分分析。    结果  贵州苗族与湘西苗族男性的内脏脂肪等级、躯干脂肪率与年龄成正相关,总肌肉量、躯干肌肉量与年龄成负相关。两个地区苗族女性的内脏脂肪等级、躯干脂肪率与年龄成正相关,推定骨量、躯干肌肉量与年龄成负相关。贵州苗族与湘西苗族男性体重、肌肉量、推定骨量、水分率、内脏脂肪等级、四肢及躯干肌肉量等指标值均大于女性,体脂率、四肢及躯干脂肪量均小于女性。贵州苗族与湘西苗族男性、女性体脂率、四肢及躯干脂肪率均较为相近,总肌肉量、下肢及躯干肌肉量小于湘西苗族。    结论  贵州苗族与湘西苗族肌肉量有明显的地区差异。 
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    辽宁省汉族成人少肌症、少肌性肥胖与骨质疏松症的相关性
    李甲一 席焕久 温有锋 桂超 张晓明 张海龙
    2023 (2):  238-243.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.017
    摘要 ( )   PDF(803KB) ( )  
    目的  探讨少肌症、少肌性肥胖和骨质疏松的患病率,分析少肌症、少肌性肥胖对骨质疏松的影响。   方法  选取20岁以上的辽宁汉族成年人群作为实验研究对象,样本量共纳入1266例。利用生物电阻抗分析仪(BIA)、骨密度仪测定各年龄段身体各部肌肉量、脂肪量和骨密度的分布情况,对成人少肌症、少肌性肥胖与骨质疏松症进行相关性研究。   结果  辽宁汉族成年人群,随年龄增长,其全身、躯干、四肢肌肉量及体重均呈现先升高,后降低的发展趋势。少肌症和少肌性肥胖患病率的性别间差异无统计学意义,而骨质疏松患病率的性别间差异有统计学意义。少肌症、少肌性肥胖、骨质疏松的患病率均在60岁以上人群达到峰值。少肌症和少肌性肥胖均为骨质疏松的危险因素。   结论  在辽宁地区汉族成年人群中,少肌症、少肌性肥胖及骨质疏松患病率年龄差异较为显著,骨质情况与骨骼肌质量和脂肪量有直接关系,会受到肌肉质量及脂肪量的影响。 
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    肿瘤生物学
    微小RNA-30d-5p通过葡萄糖调节蛋白78调控骨髓基质细胞成骨分化的机制
    李光 李杰 张平
    2023 (2):  195-201.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.010
    摘要 ( )   PDF(10599KB) ( )  
    目的  探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制。   方法  将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果,茜素红染色检测钙结节沉淀情况,TUNEL检测凋亡水平。Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点。   结果  MiR-30d-5p过表达后,细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P< 0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05)。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。但是,miR-30d-5p抑制剂处理细胞后,细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05)。GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05)。MiR-30d-5p结合位点位于GRP78基因3’UTR的142~148 bp 处。   结论  MiR-30d-5p通过下调GRP78蛋白的表达抑制骨髓基质细胞成骨分化,并且促进细胞凋亡。 
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    细胞和分子生物学
    大鼠肝再生的肝细胞干性变化中性别决定区转录因子2 mRNA和其他非编码RNA的表达变化与作用
    王子慧 郭建林 臧夏炎 薛奇杰 林凯琳 张春博 韩璐 林俊堂 徐存拴
    2023 (2):  202-207.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.011
    摘要 ( )   PDF(4578KB) ( )  
    目的  了解大鼠肝再生(LR)0 h和2 h时性别决定区转录因子2(SOX2)基因及其mRNA相互作用的微小RNA(miRNA,miR)和环状RNA(circRNA)的表达变化、相互作用和调节肝细胞干性变化的途径与方式。   方法  按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy, PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量检测技术测定大鼠肝再生中肝细胞的mRNA、miRNA合称内源竞争RNA(ceRNA)的表达变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网,用ceRNA综合分析等方法解析它们的表达相关性和作用相关性。   结果  PH后0 h和2 h时,SOX2 mRNA的比值为1.00±0.09和2.15±0.48,miR-3558-3p为4.53±0.10和0.81±0.16,circRNA_18404为1.24±0.04和11.10±0.57,circRNA_18045为1.97±0.47和4.44±0.23。同时,PH后0 h时,SOX2促进的富含AT的交互域5A(ARID5A)、激活转录因子3(ATF3)、BTG抗增殖因子 2(BTG2)等8个细胞去分化相关基因表达下调,抑制的细胞分化相关基因干扰素调节因子6(IRF6)和生长抑素(SST)表达上调。PH后2 h时,SOX2促进的ARID5A、ATF3、BTG2等8个细胞去分化相关基因表达上调,抑制的细胞分化相关基因SST表达下调、IRF6未发生有意义表达变化。    结论  上述circRNA抑制的miRNA、miRNA抑制的SOX2 mRNA以及SOX2调节的细胞干性相关基因的表达相关性和作用相关性有利于PH后0 h时肝细胞处于分化状态和PH后2 h时肝细胞处于干性状态。
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    羟基类固醇脱氢酶基因家族单核苷酸多态性与指长比的关联性
    李帆 马占兵 张静 杨梦怡 王媛 马茜 陆宏 霍正浩 党洁
    2023 (2):  208-215.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.012
    摘要 ( )   PDF(6064KB) ( )  
    目的  探讨羟基类固醇脱氢酶基因家族8个单核苷酸多态性(SNPs)与人类指长比(2D∶4D)的关联性。   方法  随机选取808名在校大学生(男性400名,女性408名)为研究对象,拍摄双手掌面照片后利用电脑图像 软件测量并计算左、右手各指长比;多重PCR法对11β-羟基类固醇脱氢酶(HSD11B)和17β-羟基类固醇脱氢酶(HSD17B)基因家族8个SNPs位点(rs1000283,rs2236903,rs5479,rs56303414,rs676387,rs4445895,rs2066474,rs8190478)进行基因分型;单因素方差分析法分析不同基因型与2D∶4D的关联。   结果  宁夏大学生女性左手(L)2D ∶3D,L2D ∶4D、L3D ∶4D、右手(R)2D ∶4D、R2D ∶5D均显著高于男性(P<0.05);rs2236903(HSD11B1)的基因型频率在男女间的差异具有统计学意义(P<0.05);HSD11B1基因的rs1000283-rs2236903及HSD11B2基因rs5479-rs56303414存在强关联,但其频率在男女两性间差异均无统计学意义(P >0.05);不论男性还是女性,8个SNPs位点基因型频率与指长比(2D ∶4D)无显著关联(P>0.05)。   结论  宁夏汉族大学生群体的指长比性别差异存在显著性,然而,其与HSD11B和HSD17B基因家族8个SNPs位点基因多态性无关联性,提示其可能与人类指长比的形成无关。
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    解剖学
    丽纹攀蜥肌硬膜桥的存在及形态学特征
    白雪 康昊男 豆娅茹 唐炜 郑楠 隋鸿锦
    2023 (2):  220-225.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.014
    摘要 ( )   PDF(5887KB) ( )  
    目的  人肌硬膜桥为枕下头后小直肌、头后大直肌、头下斜肌及项韧带等与硬脊膜之间的致密纤维连接结构,具有重要的生理作用及临床意义。已有研究提出肌硬膜桥可能与脑脊液循环和慢性颈源性头痛有关。目前研究发现,哺乳动物中普遍存在肌硬膜桥这一结构,并且鸟类中的家鸡、岩鸽,爬行纲中的暹罗鳄、巴西龟都存在肌硬膜桥样结构。为进一步分析肌硬膜桥在不同纲目的结构形态差异,为其功能研究提供基础。本次研究以爬行纲蜥蜴目中最常见的丽纹攀蜥为实验对象,补充爬行纲肌硬膜桥的形态特点。   方法  采用大体解剖、厚断层切片、组织学切片染色等方法,对20只丽纹攀蜥的枕后区结构特点及肌硬膜桥样结构的存在情况进行观察。   结果  丽纹攀蜥枕后肌由融合的头背大直肌、头背小直肌、头前斜肌(我们定义为头背直肌)及头后斜肌构成。于寰枕间隙内,自头背直肌腹侧发出的片状致密纤维连接组织向腹侧走行,与硬脊膜紧密相连。于寰枢间隙内,自头后斜肌腹侧发出的致密纤维连接组织向腹侧走行,与硬脊膜紧密相连。且此致密纤维连接结构为具有极强双折光性的Ⅰ型胶原纤维。   结论  丽纹攀蜥的头背直肌、头后斜肌与硬脊膜之间存在致密的纤维连接结构,即肌硬膜桥样结构。此结构可能与丽纹攀蜥头颈部的活动密切相关,发挥与人类肌硬膜桥相似的生理功能。 
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    组织学胚胎学发育生物学
    延时成像监测第二极体释放预测卵胞质内单精子注射卵子受精及胚胎发育效率
    薛林涛 王世凯 毛献宝 李政达 张小慧 韦娉嫔
    2023 (2):  226-230.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.015
    摘要 ( )   PDF(2335KB) ( )  
    目的  探讨延时成像监测第二极体(Pb2)释放在预测卵胞质内单精子注射(ICSI)周期卵子受精及胚胎发育效率中的临床应用价值。   方法  回顾性分析278个接受ICSI助孕治疗患者的临床资料和延时成像监测胚胎培养数据,探讨卵子ICSI注射后Pb2释放与否以及具体释放时间与受精及胚胎发育结局的关系。   结果  延时成像监测ICSI注射后Pb2释放平均时间为(3.03±1.21)h;有Pb2释放组的受精率、2原核(2PN)受精率及5d(D5)囊胚转化率均显著高于无Pb2释放组(99.95% vs 1.75%,P<0.001;97.18% vs 0.66%,P<0.001;60.50% vs 16.67%,P<0.05);Pb2释放时间>3~4 h组2PN受精率显著高于0~2 h组和>5 h组(98.80% vs 93.81%,P<0.05; 98.80% vs 95.40%,P<0.05);Pb2释放时间与D3胚胎平均卵裂球数显著相关(P<0.001);>3~4 h组D5囊胚转化率显著低于>2~3 h组(56.23% vs 67.23%,P<0.05),>4~5 h组显著低于0~2 h组、>2~3 h组(46.61% vs 62.30%,P<0.05; 46.61% vs 67.23%,P<0.05),>5 h组D5囊胚转化率为7.14%,均显著低于其他4组(P<0.05);>3~4 h组D5优质囊胚转化率显著低于0~2 h组、>2~3 h组(9.92% vs 16.39%,P<0.05; 9.92% vs 20.72%,P<0.05),>4~5 h 组显著低于>2~3 h组(11.02% vs 20.72%,P<0.05)。   结论  延时成像监测Pb2释放可以准确预测受精结局,Pb2释放时间与胚胎发育潜力显著相关,是有价值的预测ICSI卵子受精及胚胎发育结局的形态学指标。 
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    技术方法
    颌骨内异物取出术的手术导板设计和应用
    毛梦芸 王成泽 朱海华 樊明星 吴笑妃 朱赴东
    2023 (2):  244-248.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.018
    摘要 ( )   PDF(9669KB) ( )  
    目的 设计一款辅助颌骨内异物取出术的新型手术导板,并进行体外模型评估和临床验证。   方法  基于锥形束计算机断层扫描数据和环钻技术,自主设计颌骨内异物取出术的外科手术导板,通过体外羊下颌骨模型评估该导板的可行性和准确性,并将其成功应用于临床病例。通过在柱状骨的六角和顶点处测量7个参数(cdh、cda、hdh、hda、vdh、vda和ad)距离,计算轴偏移角,评估实际去除和计划去除圆柱状骨之间的线性和角度偏差。   结果  体外模型显示该导板的六角和顶点的平均中心偏差分别为(0.51±0.14) mm和(0.62±0.19) mm。六角处的水平偏差为(0.48±0.16) mm,顶点处的水平偏差为(0.52±0.22) mm,六角处的垂直偏差为(0.17±0.09) mm,顶点处的垂直偏差为(0.29±0.13) mm,角度偏差为(5.38±3.43)°;在临床病例中,术者在导板帮助下,成功定位并取出了颌骨内断裂的根管锉。   结论  本款新型手术导板能够有效辅助目标性定位和微创性取出颌骨内断裂器械等异物。 
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    神经生物学
    APP/PS1小鼠嗅球神经元的早期树突分支和长度及钾-氯离子共运转体2蛋白表达异常
    陈搏雨 江锦祥 张家玮 杨莉
    2023 (2):  127-133.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.001
    摘要 ( )   PDF(1793KB) ( )  
    目的 探讨嗅球(OB)神经元的形态和相关蛋白的变化,探讨导致阿尔茨海默病(AD)嗅觉功能障碍的原因。   方法  采用高尔基-考克斯(Golgi-Cox)染色技术评估AD模型小鼠(APP/PS1小鼠)的OB和前梨状皮质(aPC)的神经元形态变化;使用Sholl分析对神经元的形态学进行测量;采用Western blotting检测蛋白质表达水平。   结果  高尔基-考克斯染色结果显示,在3~5月龄,该模型鼠尚未表现出AD的病理特征及认知障碍时,OB已经发生神经元树突长度和分支数量的显著减少。Western blotting检测发现,对神经元形态和突触功能至关重要的钾氯离子共转运体2(KCC2)蛋白表达在3~5 月龄APP/PS1小鼠的OB中显著降低。   结论  异常的神经元形态和KCC2信号途径改变可能是AD早期嗅觉功能障碍的基础;维持KCC2信号正常有望成为干预AD早期嗅觉异常的有效途径之一。 
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    慢性束缚应激对小鼠海马N6甲基腺苷及相关酶表达的影响
    张圆 时萌萌 贺嘉贝 吴琼 钟小林 向宇燕 徐杨 何洁
    2023 (2):  142-148.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.003
    摘要 ( )   PDF(2364KB) ( )  
    目的 探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响。   方法 将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组;给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型,采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各组小鼠焦虑样行为变化;采用免疫组织化学法和m6A RNA 甲基化检测试剂盒检测小鼠海马m6A的表达变化;采用Western blotting和Real-time PCR方法分析海马m6A相关酶表达变化。  结果 1.小鼠焦虑相关行为学检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠在旷场内框停留时间明显下降(P< 0.01);高架十字迷宫开放臂探索时间减少(P<0.0001);2. m6A RNA 甲基化检测试剂盒检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A含量明显减少(P<0.05);免疫组化结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A阳性产物明显减少(P<0.001);3. PCR结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶间变性淋巴瘤激酯B(AlkB)同源蛋白5(ALKBH5)(P<0.001)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)表达显著上调(P<0.05);甲基化酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)(P<0.05)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTH结构域家族蛋白3(YTHDF3)(P<0.05)和YTH结构域蛋白2(YTHDC2)(P<0.01)表达显著上调。Western blotting 结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶ALKBH5(P<0.05)、FTO(P<0.05)表达显著上调;甲基化酶WTAP(P<0.01)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTHDF3(P<0.01)和YTHDC2(P<0.05)表达显著上调。    结论 在慢性束缚应激所致小鼠焦虑与海马m6A表达下调有关,其机制可能与m6A甲基化酶WTAP表达下调或去甲基化酶ALKBH5和FTO表达上调相关。 
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    瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响
    郭东铭 张静文 黄新磊 徐杨 熊天庆 曹文宇 梁景岩
    2023 (2):  149-155.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.004
    摘要 ( )   PDF(3645KB) ( )  
    目的  探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。   方法  48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型,HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg), NS组及LPS组注射等体积溶媒;旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为;免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS) 和内皮型一氧化氮合酶(eNOS) 的表达情况。   结果  免疫组织化学和Western blotting实验发现,与NS组相比,LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中,与NS组比较,发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(P<0.05)、在中央区域活动的距离(P<0.001)以及在中央区域的活动时间(P<0.01);社会交往实验中,与NS组相比,LPS组小鼠与陌生小鼠的交往时间显著降低(P<0.01),HC067047干预后能显著增加LPS模型小鼠与陌生小鼠的交往时间(P<0.01);Western blotting检测发现,LPS组小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.001)和eNOS(P<0.001)的表达显著高于NS组,但HC067047干预后可使LPS模型小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.01)、eNOS(P<0.01)的表达明显降低。   结论 抑制TRPV4的表达能够改善LPS所致小鼠焦虑样行为,该过程可能与抗氧化应激有关。 
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    基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子κB通路探讨高原缺氧对大鼠蛛网膜下腔出血后血脑屏障的作用
    魏艳娜 王锋存 马香莲 索田莎 陈胜 王兰桂 孙娟 赵秀丽
    2023 (2):  156-164.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.005
    摘要 ( )   PDF(5680KB) ( )  
    目的  探讨高原缺氧对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后血脑屏障的作用及其机制。   方法  SPF级健康成年雄性SD大鼠(n=78),随机分为4组:假手术组(sham)、蛛网膜下腔出血模型组(SAH)、高原缺氧假手术组(Hp sham)和高原缺氧蛛网膜下腔出血模型组(Hp SAH)。通过低压模拟舱(海拔5000 m)饲养4 d建立高原缺氧大鼠动物模型,采用颈内动脉刺破法建立SAH大鼠动物模型。SAH后24 h,各组大鼠进行神经功能学评分和出血严重程度评估,Nissl染色和TUNEL染色分别观察大鼠海马组织CA1区神经元形态变化和神经细胞凋亡,Western blotting检测大鼠海马组织磷酸化PI3K(p-PI3K)、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、Akt 、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、 NF-κB及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白-5(claudin-5)的表达,免疫荧光染色观察大鼠海马组织CA1区occludin、claudin5蛋白表达。   结果  SAH后24 h,SAH组与Sham组、Hp SAH组与Hp Sham组比较,大鼠神经功能评分明显下降,颅底出血量明显增加(P<0.05),Hp SAH组与SAH组比较,神经功能评分明显下降(P<0.05);SAH组与sham组比较,大鼠海马组织CA1区神经元形态萎缩变形,神经元细胞排列紊乱,神经元数量明显下降,神经细胞凋亡明显增加(P<0.05),高原缺氧后上述神经元形态损伤和神经细胞凋亡进一步加重;SAH组与sham组、Hp SAH组与Hp sham组比较,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、occludin及claudin5蛋白的表达明显下降,p-NF-κB/NF-κB和MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05),Hp SAH组与SAH组比较,p-PI3K/PI3K和MMP-9蛋白表达明显升高,Hp sham组与sham组比较,claudin-5蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色发现,SAH组大鼠海马组织CA1区occludin、claudin-5蛋白的表达下降,高原缺氧后occludin、claudin-5蛋白的表达进一步降低。   结论  高原缺氧通过抑制PI3K/Akt/NF-κB通路加重蛛网膜下腔出血大鼠模型后血脑屏障破坏。
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    胆固醇代谢障碍影响ob/ob小鼠室管膜下区神经发生
    李瑞婷 雷凌峰 杨娜 向治俞 李泽锴 陆利
    2023 (2):  165-174.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.006
    摘要 ( )   PDF(8887KB) ( )  
    目的  检测胆固醇对ob/ob肥胖小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响,探讨肥胖引起中枢神经系统功能障碍的可能机制。    方法  选取4月龄ob/ob和野生型(WT)小鼠各6只,运用细胞增殖抗原(Ki67)和双皮质素(DCX)免疫荧光染色检测ob/ob小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经发生水平;分离培养18只4月龄ob/ob和WT小鼠SVZ的 NSCs,运用BrdU掺入实验和β-Ⅲ-微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色检测NSCs的自我更新和分化能力。运用基质辅助激光解飞行时间质谱(MALDI-MS)分别检测3只ob/ob和WT小鼠脑组织的脂质分布,并分析胆固醇(ST)含量和胆固醇合成相关基因的表达变化。体外培养15只WT新生鼠(P0)SVZ 的NSCs,并通过电穿孔法转染胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶 A还原酶(Hmgcr)的小干扰RNA(siRNA),验证敲减效率,并通过BrdU掺入实验和Tuj1免疫荧光染色检测Hmgcr基因敲减对NSCs的影响。   结果  与WT小鼠相比,ob/ob 小鼠SVZ部位 Ki67+和DCX+ 细胞数量均显著下降(P<0.05)。体外实验结果显示,ob/ob小鼠NSCs的BrdU阳性率(P<0.05)和Tuj1阳性率(P<0.05)较WT小鼠NSCs显著下降。MALDI-MS结果显示,在ob/ob小鼠SVZ部位,ST(26∶0)和ST(27∶3)分布较WT小鼠明显减少;同样,试剂盒检测结果显示,与WT小鼠相比,ob/ob小鼠SVZ组织及NSCs的胆固醇含量显著降低(P<0.05); Real-time PCR结果显示,ob/ob小鼠SVZ组织和NSCs的胆固醇合成相关基因Hmgcr、羊毛甾醇 14α-脱甲基酶(Cyp51)、3-β-羟基类固醇-Δ8,Δ7-异构酶(Ebp)和角鲨烯合酶(Fdft1)的mRNA表达水平均较WT小鼠显著下降(P<0.05),提示ob/ob小鼠SVZ的胆固醇合成障碍。Real-time PCR结果显示,Hmgcr-siRNA的干扰效率为55.27%±8.768%(P<0.05),Western blotting结果显示,Hmgcr-siRNA的干扰效率为32.69%±8.056%(P<0.05);BrdU掺入实验结果显示,Hmgcr-siRNA组的BrdU阳性率较对照(control)组显著下降(P<0.05);1% FBS诱导分化后,Hmgcr-siRNA组Tuj1阳性率较control组也显著下降(P<0.05),提示胆固醇合成受损抑制神经干细胞的自我更新和分化能力。   结论  ob/ob小鼠脑内胆固醇水平下降可影响SVZ部位 NSCs增殖分化能力。 
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    聚肌苷酸聚胞苷酸对高血脂大鼠脑缺血/再灌注后Bcl-2和Bax表达的影响及神经保护作用
    高赛红 张小良 杨迎春 乔海兵
    2023 (2):  175-180.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.007
    摘要 ( )   PDF(6795KB) ( )  
    目的  观察聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly-IC)处理对高血脂大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后Bcl-2和Bax表达的影响,同时检测脑梗死灶、血脑屏障通透性和行为损伤症状,探讨其对高血脂合并脑I/R损伤是否发挥神经保护作用。   方法  高血脂大鼠随机分为脑I/R组、Poly-IC预处理组、Poly-IC后处理组和假手术(Sham)组,每组20只。0~4分神经行为评分记录各组大鼠的神经行为表现,伊文思蓝染色法检测各组大鼠血脑屏障通透性,TTC染色法观察各组大鼠脑组织梗死情况,TUNEL染色法测神经细胞的凋亡情况,Western blotting观察Bcl-2 和Bax相对表达水平。   结果  与sham组比较,I/R 组神经行为损伤症状严重,评分明显升高 (P<0.05)。而Poly-IC 预处理和后处理组评分较 I/R组均明显降低(P<0.05)。伊文思蓝染色结果显示,I/R组较sham组血脑屏障通透性明显增高(P<0.05),而Poly-IC预处理或后处理可明显改善血脑屏障通透性(P<0.05)。脑梗死体积检测结果显示,sham组未见梗死灶均匀红染,而I/R组脑组织可见白色梗死区。与I/R组比较,Poly-IC预处理和后处理组梗死灶体积均明显缩小(P<0.05)。I/R组大鼠大脑皮质内细胞凋亡指数较sham组显著升高(P<0.05),而Poly-IC预处理和后处理组大鼠大脑皮质内细胞凋亡指数较I/R组均明显降低(P<0.05)。与sham组比较,I/R组Bax表达明显升高(P<0.05),Bcl-2表达明显降低(P<0.05)。与I/R组比较,Poly-IC预处理和后处理组Bax表达均明显降低(P<0.05),Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。   结论  Poly-IC预处理或后处理可改善神经行为损伤症状,减轻血脑屏障损害,缩小脑梗死体积,降低神经细胞凋亡指数,对高血脂大鼠脑I/R损伤起到神经保护作用;该保护作用可能与Bcl-2和Bax表达水平改变有关。 
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    右美托咪定上调海马脑源性神经营养因子-酪氨酸激酶受体B的表达及改善完全费氏佐剂所致小鼠焦虑样和抑郁样行为
    王雅娟 杨彬 曾学晴 梁玥 刘志文 曹文宇 钟小林
    2023 (2):  181-187.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.008
    摘要 ( )   PDF(3001KB) ( )  
    目的  探讨α2-肾上腺素受体激动剂右美托咪定(DEX)对完全弗氏佐剂(CFA)诱导疼痛模型小鼠焦虑样和抑郁样行为的影响及其可能的机制。   方法  36只ICR雌鼠随机分成生理盐水(NS)组、CFA组和DEX+CFA组,每组n=12。向小鼠右后肢足底皮下注射10 μl CFA建立慢性炎性疼痛模型,DEX+CFA组小鼠在痛阈检测前30 min腹腔注射0.025 mg/kg DEX,1次/1 d,持续7d。实验采用von-frey纤维丝评价3组小鼠机械性痛阈值;采用旷场实验检测小鼠焦虑样行为;采用糖水偏好、悬尾实验和强迫游泳检测3组小鼠抑郁样行为;采用Western blotting检测3组小鼠海马肾上腺素能受体β2(ADRB2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶B受体(TrkB)及突触相关蛋白谷氨酸受体1(GluR1)和GluR2的表达,每组 n=8;采用免疫组织化学染色方法检测各组小鼠海马新生神经元标记物双肾上腺皮质激素(DCX)的表达情况,每组 n=4。   结果  痛阈检测结果显示,与NS组相比,CFA注射后的第1天、3天、7天小鼠机械痛阈值均显著降低(P<0.05);与CFA组相比,DEX+CFA组小鼠机械疼痛阈值差异无显著性(P>0.05)。旷场结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠进入中央格区域的时间(P<0.01)、次数(P<0.01)和中央格运动距离(P<0.01)均明显减少,而DEX+CFA组小鼠进入中央格区域的时间(P<0.01)、次数(P<0.05)和距离(P<0.05)明显多于CFA组。抑郁样行为检测结果显示,CFA组小鼠糖水偏好百分比(P<0.05)与NS组相比明显减少,悬尾不动时间(P<0.01)和强迫游泳不动时间(P<0.001)与NS组相比均显著增加;而DEX干预能明显增加小鼠糖水偏好百分比(P<0.05),降低小鼠悬尾不动时间(P<0.05)和强迫游泳不动时间(P<0.05)。Western blotting结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马ADRB2(P<0.001)、BDNF(P<0.001)、TrkB(P<0.01)、GluR1(P<0.001)和GluR2(P<0.001)明显减少;DEX干预能明显增加ADRB2(P<0.05)、BDNF(P<0.001)、TrkB(P<0.001)、GluR1(P<0.001)和GluR2(P<0.001)的表达。免疫组织化学结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马DCX平均吸光度显著降低(P<0.05);与CFA组相比,DEX+CFA组小鼠海马DCX平均吸光度显著升高(P<0.05)。   结论 右美托咪定可能通过上调BDNF-TrkB的表达促进海马神经发生,从而改善CFA所致小鼠焦虑样和抑郁样行为。 
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     脑红蛋白在赛加羚羊脑组织中的表达与定位
    刘霞 郑丽平 杜晓华 王玉娇 吴亚娟
    2023 (2):  188-194.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.009
    摘要 ( )   PDF(17141KB) ( )  
    目的  赛加羚羊( Saiga antelope )是小种群栖息在荒漠和半荒漠地带的国家及世界濒危保护动物,其野生种群极为罕见。为了探讨赛加羚羊的低氧耐受性与脑红蛋白(NGB)的相关性,以1只因难产而死的雌性赛加羚羊为对象,各组织样品重复取样3次,对赛加羚羊脑组织在适应低氧过程中脑红蛋白的分布情况与表达规律进行了研究。  方法  利用免疫组织化学和Real-time PCR技术,检测NGB在赛加羚羊脑组织顶叶、额叶、颞叶、枕叶、下丘脑、海马、梨状叶、扣带回、纹状体和丘脑中分布特征和表达量。     结果  免疫组织化学染色结果表明,NGB在赛加羚羊脑组织的各部位均有阳性表达,在大脑皮质顶叶、额叶、颞叶和枕叶中发生阳性反应的细胞多为颗粒细胞和马丁诺蒂细胞;海马中的颗粒细胞层、锥体细胞层和分子细胞层均可见NGB的阳性表达,其中锥体细胞层阳性反应着色最强;梨状叶和下丘脑中的NGB阳性表达主要发生在多型细胞中;NGB在扣带回的颗粒细胞和胶质细胞中均有阳性表达,主要表达于颗粒细胞中;NGB在纹状体中的阳性表达主要定位于颗粒细胞;NGB在丘脑中的阳性表达可见于多型细胞和神经胶质细胞,且多型细胞的阳性物质着色明显。Real-time PCR结果表明,NGB在赛加羚羊脑组织不同区域中均有表达,在大脑皮质的额叶中表达量最高,顶叶表达量次之,且表达量均显著高于脑组织其余区域(P<0.05);其中,海马、下丘和丘脑中的表达量显著高于其余区域(P<0.05);梨状叶表达量显著高于颞叶、枕叶、扣带回和纹状体(P<0.05);颞叶和枕叶的表达量显著高于扣带回和纹状体(P<0.05);在扣带回和纹状体中的表达量最低(P>0.05)。   结论  赛加羚羊脑组织不同区域NGB的表达在长期适应低氧环境过程中存在一定的选择性差异,额叶和顶叶对低氧具有相对最高的耐受度,海马等次之,纹状体对低氧耐受度相对最弱,这可能与脑组织不同区域的特定功能有关。
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    小脑发育过程中Atoh1时空表达模式
    薛赛赛 陈丽萍 李莹 吴燕 吴海涛
    2023 (2):  134-141.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.002
    摘要 ( )   PDF(6082KB) ( )  
    目的 探究小脑发育过程中转录因子Atoh1 mRNA及其蛋白的时空表达模式。方法 取不同发育阶段的小鼠小脑冷冻切片,RNA scope技术分析Atoh1 mRNA在小脑中的时空表达模式,每组 n=3。同时,使用Atoh1转基因和基因敲入两种不同遗传学策略的报告小鼠,采用免疫荧光染色技术分析Atoh1在蛋白水平的时空表达,每组n=3。  结果  Atoh1 mRNA在胚胎小脑菱唇和外颗粒细胞层中呈高表达;Atoh1-3 *V5-P2A-tdTomato/+基因敲入小鼠染色结果显示,Atoh1主要表达在菱唇和有增殖能力的外颗粒细胞层的外层;Atoh1-Cre;tdTomato/+转基因小鼠显示,Atoh1阳性细胞在菱唇和整个颗粒细胞发育过程中包括外颗粒细胞层和内颗粒细胞层中均呈高表达。  结论  小脑发育过程中,Atoh1 mRNA和蛋白在胚胎期的菱唇和出生后的外颗粒细胞层中高丰度表达;但在蛋白水平上,基因敲入小鼠和转基因小鼠Atoh1在菱唇和外颗粒细胞层中的表达略有不同。 
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    解剖学
    肱二头肌短头近端起源部位的解剖学特征
    徐高磊 刘锦 易诗琦 张译铮 张振华
    2023 (2):  216-219.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2023.02.013
    摘要 ( )   PDF(7565KB) ( )  
    目的  分析和描述肱二头肌近端起源部位的形态学特点,并测量其肌腱的解剖学数据,为肱二头肌的相关临床应用提供参考。   方法  在6侧成人肩部标本上(左4具,右2具)解剖观察肱二头肌短头肌腱的起源、形态、走行以及其与喙肱肌、肌皮神经等结构的毗邻关系,并测量肱二头肌短头肌腱长度、宽度和厚度。   结果  肱二头肌短头前表面覆以一层较厚的腱膜,腱膜下为肌性结构并以肌纤维直接起源于喙突尖,而不是一般意义上的腱性结构。肱二头肌短头肌腱的长度、宽度和厚度分别为(107.7±9.6)mm,(20.0±1.5)mm和(5.8±2.0)mm。   结论 肱二头肌短头是以肌纤维直接起于喙突。 
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