解剖学报

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朱占占侯宾孙雯雯院慧芳张永春蔡新华

2017 (1): 43-47. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.008

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目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白（LV-SDF-1α-GFP）对心肌成纤维细胞影响，最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞，观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞，观察荧光表达，探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞，绘制生长曲线，探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞，斑点印迹法（Dot blotting）检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性，传至4代纯度高，折光度好，无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数（MOI）值为10，添加感染增强液，聚凝胺组感染效果最好，效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小，细胞形态无明显变化，与非转染组生长曲线相似，差异无统计学意义（P＞0.05）。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率，细胞毒性小，并能够分泌SDF-1α目的蛋白。

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应用酵母双杂交系统筛选与蛋白激酶Pkmyt1相互作用的候选分子

刘超孟智超栾治东任丽莉刘乙蒙肖建英

2017 (1): 48-53. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.009

摘要 ( )

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目的蛋白激酶Pkmyt1负调控小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂的进程，但具体调控机制还不清楚。因此，利用酵母双杂交系统从人卵巢cDNA文库中筛选与Pkmyt1相互作用的候选蛋白，为研究Pkmyt1调控小鼠受精卵早期发育提供新线索。方法以小鼠卵巢组织cDNA为模板，构建pGBKT7-Pkmyt1诱饵质粒，转化酵母感受态细胞后，分别接种于SD/-Trp(SDO)、SD/-Trp/X-α-Gal(SDO/X)和SD/-Trp/X-α-Gal/AbA plates(SDO/X/A)培养板，检测其对酵母的毒性和自身激活能力，Western blotting法检测pGBKT7-Pkmyt1在酵母细胞中的表达。将人卵巢cDNA文库与含有pGBKT7-Pkmyt1的酵母感受态细胞融合，PCR筛选出阳性克隆，提取质粒，测序鉴定，再次检测其对酵母自激活能力，利用生物信息学分析筛选蛋白与胚胎发育的关系。结果酶切鉴定和Blast分析表明pGBKT7-Pkmyt1质粒构建成功。将该质粒转入Y2H golden中，在SDO板上克隆均匀生长，在SDO/X/A平皿上无克隆生长，Western blotting 检测Pkmyt1在酵母细胞中有表达。PCR验证融合后的阳性克隆质粒有插入片段。通过初步筛选得到182种能够与Pkmyt1相互作用的蛋白质，经回复性实验进一步验证有46个与Pkmyt1之间存在相互作用的蛋白。结论通过筛选发现46个蛋白可能通过与Pkmyt1相互作用调控小鼠卵母细胞成熟和受精卵早期发育。

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慢性低氧时牦牛和迁饲黄牛颈动脉体组织形态的比较

刘凤云马岚胡琳李愈娴刘世明吴天一

2017 (1): 70-77. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.013

摘要 ( )

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目的对牦牛、迁饲黄牛及低海拔黄牛颈动脉体（CB）形态及CB中低氧相关因子的表达进行比较，探讨高原土生或迁饲动物CB适应慢性低氧的模式。方法采集青海地区海拔3000～4000m的9头牦牛、2500m的9头高山迁饲黄牛及甘肃平原海拔1300米的12头低海拔黄牛的CB，固定、切片、染色后行光学显微镜和电子显微镜比较观察，并对CB中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、一氧化氮合酶（NOS）、瘦素受体（LEPR）、促红细胞生成素（EPO）等低氧相关因子的表达进行免疫组织化学观察。结果相比黄牛，牦牛CB体积较小，不同海拔牦牛的CB大小、形态及主细胞数量差异无显著性，而迁饲黄牛CB体积较低海拔黄牛大。牦牛CB主细胞中明细胞、暗细胞和固缩细胞的数量百分比比例为67.1%∶28.2%∶4.7%,迁饲黄牛为78.5%∶18.6%∶2.9%，低海拔黄牛为87.3%∶10.2%∶2.5%；与低海拔黄牛相似，牦牛CB少部分明细胞胞质透亮，暗细胞胞核染色质较致密并呈粗颗粒状，而迁饲黄牛CB大部分明细胞胞质透亮，暗细胞胞核染色质致密，颗粒稀少。3种牛支持细胞形态差异无显著性。与低海拔黄牛相比，迁饲黄牛CB主细胞的少数核异染色质增多，个别形态异常，胞质内多数细胞器肿胀溶解，残留少量细胞器和致密核心囊泡。3种牛CB中均有不同程度的HIF-1a、NOS、LEPR、EPO的蛋白表达，其中牦牛CB中EPO蛋白表达阳性率较低海拔黄牛明显降低（P<0.05）。结论海拔高度不是影响牦牛颈动脉体大小和主细胞数量的主要因素。迁饲黄牛CB主细胞中细胞类型的比例与牦牛有趋同性改变，但缺氧时行使功能的I型细胞功能系统受损，尚处于低氧环境下的习服阶段。慢性低氧可能主要影响牦牛和迁饲黄牛CB中EPO蛋白表达。

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活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响

许梦婷刘乃国董洪亮郑静倪娜王楠

2017 (1): 78-86. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.014

摘要 ( )

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目的探讨活性维生素D3［1,25(OH)₂D₃］在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响。方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组（90只）和纤维化后干预组（60只），纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ（n=30），纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ（n=20）。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素（5mg/kg）建立肺纤维化模型，对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水。给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3，模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂（0.1%乙醇和99.9%的丙二醇），对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水。各种处理均为两天1次。纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材，纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材，各小组每个时间点10只大鼠。用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异，用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化，用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白 (Col)ⅠmRNA 及miR-29a的相对表达量，用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化。结果博来霉素处理后，第14天大鼠肺部已经出现纤维化，随着时间推移，纤维化进一步加重。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ，而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少。给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加（P<0.05）。在纤维化发生干预组中，与模型组Ⅰ相比，给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都显著降低（P<0.05），但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低，但差异无显著性（P>0.05）。结论活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用，其预防效果更好一些，并且能促进miR-29a的表达，活性维生素D3可能是通过促进miR-29a的表达来抑制肺纤维化的发生发展。

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冷冻保存对正常和不育症精子PH-20表达和凋亡的影响

马晓萍高晓勤周桦王珺

2017 (1): 87-91. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.015

摘要 ( )

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目的探讨冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20表达和精子凋亡的影响。方法 14例正常生育力精液标本(A组) 和20例不育症精液标本(B组) 行冷冻保存。Western blotting检测PH-20蛋白在人精子中的表达，免疫荧光用来观察PH-20蛋白在人精子上的定位，应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测精子凋亡情况。结果解冻后正常生育组和不育组的PH-20/β-actin 平均吸光度与冷冻前比较均有显著性下降(P<0.05);解冻后正常生育组和不育组的PH-20阳性率与冷冻前比较均有显著性下降(P<0.05)。解冻后正常生育组的精子凋亡率与冷冻前的比较差异无显著性意义(P>0.05)。而解冻后不育组的精子凋亡率与冷冻前的比较均显著性下降(P<0.05), 且不育组的降低程度大于正常生育组。结论冷冻-解冻过程可引起精子PH-20蛋白表达减少和精子PH-20阳性率降低，但冷冻保存对正常生育者的精子凋亡率无显著影响。

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Ezrin在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

谢哲李兰芳罗清雅刘毅李贵琴王耕超毛成毅易萍

2017 (1): 54-60. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.010

摘要 ( )

PDF(505KB) ( )

目的通过检测 Ezrin在正常卵巢上皮和浆液性卵巢癌组织中的差异表达，探讨其对浆液性卵巢癌发生发展的影响。方法收取浆液性卵巢癌冷冻组织40例，正常卵巢上皮27例，提取总RNA，采用Real-time PCR技术检测Ezrin mRNA在两组样本中的表达差异；选取有完整临床病理资料的浆液性卵巢癌石蜡包埋组织134例，以及27例非卵巢癌病例的卵巢上皮组织，通过免疫组织化学染色检测两组样本中Ezrin蛋白质的表达差异，并应用SPSS 20.0软件分析其与临床病理的相关性。结果 Ezrin mRNA在新鲜卵巢癌组织中的表达显著低于正常卵巢上皮组织（P<0.05）。Ezrin蛋白在石蜡包埋卵巢癌组织中也相应降低（P<0.05)。Ezrin蛋白质表达水平与年龄、手术满意程度及化疗敏感程度无相关性，与细胞分化、病理分期及大网膜转移显著相关，（P<0.05)。Ezrin表达水平高的浆液性卵巢癌病例的无进展生存期（PFS）值和总生存期（OS）值都明显高于表达水平低的病例（P<0.05)。但Ezrin并不能作为浆液性卵巢癌的独立预后因素。结论 Ezrin的表达下调与浆液性卵巢癌的发生发展、转移等病理过程相关，其可以作为临床预后的潜在指标。

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细胞自噬机制开启疾病治疗新途径

王海杰谭玉珍

2017 (1): 103-105. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.018

摘要 ( )

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自噬是指细胞内细胞器和蛋白质等在溶酶体被降解及其降解产物被重新利用的过程。日本科学家大隅良典（Yoshinori Ohsumi）发现了15个自噬相关基因并阐述了自噬机制，获得2016年诺贝尔生理学与医学奖。他的开创性研究成果为探讨细胞自噬的生理和病理作用奠定了重要基础，并为通过调节细胞自噬治疗疾病开辟了新途径。自噬是一种普遍性细胞反应，正常情况下细胞自噬水平很低，受生理或病理性刺激后自噬水平显著升高。自噬相关基因缺失或自噬功能障碍时可导致某些疾病的发生。近来，人们试图通过激活或抑制细胞自噬预防和治疗自噬障碍相关性疾病。

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巨噬细胞的极化及功能调控

宮甜甜黄少刚张玥李佳雷蕾单智焱

2017 (1): 106-110. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.019

摘要 ( )

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巨噬细胞在体内分布极广，具有高度可塑性，并在机体的发育及内环境的平衡中起到重要作用。应激条件下，巨噬细胞发生极化，极化后的巨噬细胞亚型可以细致调节及回应各种不同的刺激，对炎症反应或疾病的发展及组织器官的修复程度起着关键性的作用，具有重要的临床应用价值。我们在文中概述了巨噬细胞的极化分类，作用机制及不同环境下巨噬细胞的功能转换，为巨噬细胞极化研究提供理论基础。

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细胞自噬在宫颈癌中的相关研究进展

童焰谭布珍方玉婷赖智清王玉王小红

2017 (1): 111-114. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.020

摘要 ( )

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细胞自噬指细胞利用溶酶体降解细胞质中错误折叠的蛋白质及受损细胞器等，重新利用降解物质及胞内有害物质的过程，以维持细胞内环境稳定。正常状态下细胞的自噬维持在低水平，当细胞处在不利因素条件下，自噬也会被激活应对不利因素。自噬在肿瘤发生、发展、转移、复发、药物抵抗等方面有着重要作用，但自噬在这些方面的详细机制仍不清楚。我们在文中对宫颈癌细胞中自噬相关基因的表达情况进行了阐述，自噬治疗在宫颈癌中具有重要的应用前景。

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前交叉韧带解剖重建股骨隧道与外侧副韧带解剖重建股骨隧道的关系

董伊隆钱约男钟熙强刘良乐蔡春元

2017 (1): 61-64. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.011

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目的探讨前交叉韧带（ACL）单束解剖重建股骨隧道与外侧副韧带（LCL）重建股骨隧道的关系，以期为临床中ACL解剖重建提供解剖学数据，便于临床实际操作中避免2个股骨隧道相互干扰, 为ACL和LCL一期解剖重建提供依据。方法采用30例成人尸体膝部标本，保留膝关节上下至少20cm，排除关节明显退变、畸形及关节损伤。男性16例，女性14例，年龄在23～66岁，平均年龄38.7岁。屈膝120°经前内辅助入路（AMP）钻取股骨隧道。在股骨外髁外侧面寻找后外侧角（PLC）结构，钝性分离LCL，并钻取LCL隧道。标本进行CT扫描，在CT片上观察隧道碰撞数，并计算两个隧道的最短距离。结果在LCL股骨隧道深度为25mm时，其与ACL股骨隧道最短距离为（3.9±2.4）mm；在LCL股骨隧道深度为30mm时，其与ACL股骨隧道最短距离为（2.7±1.l9）mm。在ACL股骨隧道深度为25mm时，其与LCL股骨隧道的最短距离为（4.4±2.6）mm；在ACL股骨隧道深度为30mm时，其与LCL股骨隧道的最短距离为（3.2±2.1）mm。在30例标本中，共发现6例隧道碰撞，碰撞的几率高达20%。结论我们发现两者隧道发生碰撞的几率高，临床一期解剖重建时，术前应做个体化准备，规划好LCL重建所需股骨隧道的长度和隧道直径，从而规避与ACL股骨隧道的碰撞。

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肩胛骨安全区的解剖

张振华王立博崔雯铭温静彭诗琴史紫堉徐高磊

2017 (1): 65-69. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.012

摘要 ( )

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目的通过解剖学研究，评估各个肩胛骨同一区域的差异，获得一个能有效避免医源性神经损伤的安全区，为施行和改良关节镜手术提供数据参考。方法选取100个保存完好的干肩胛骨，测量肩胛体、关节盂和肩胛上神经的走行路径，用统计学方法对所得数据进行处理和分析。结果肩胛体纵向最长距离 (A)、肩胛体横向最长距离 (B)、关节盂纵向最长距离 (C)、关节盂横向最长距离 (D)与肩胛切迹到盂上结节的距离(E)的皮尔森相关系数分别为：0.797、0.786、0.792、0.687；与冈下窝的后盂缘中线到肩胛冈嵴内侧缘的距离 (F)的皮尔森相关系数分别为：0.368、0.381、0.403、0.396。根据统计学分析，国人的安全区即盂上结节到肩胛切迹的安全距离是2.2cm，冈下窝的后盂缘中线到肩胛冈嵴内侧缘的安全距离是1.3cm。结论对肩胛骨的相关指标进行评估，以便获得安全区以利于手术的进行，避免肩胛上神经的损伤；同时，线性方程预测也应该被应用于获取患者的肩胛上神经的相关解剖学数据。

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6～8岁骨龄不同体型女性儿童体脂率测量方法比较

张清刘志国杨弢鲍娟李珊珊

2017 (1): 92-98. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.016

摘要 ( )

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目的比较6～8岁骨龄段女性儿童不同的体脂率测量方法的效果，尝试建立适合我国该骨龄段女性儿童的皮褶厚度推算体脂率公式。方法抽样选取59名6～8岁骨龄段女性儿童，依据身体质量指数(BMI)分组标准分为偏瘦组、正常组和超重组3个组别，分别采用双能量X线吸收法(DEXA)、皮褶厚度法、生物电阻抗法（BIA）测试每位受试者的体脂率，以DEXA测量结果为校标，比较上述方法在推测和测量全身体脂率的差异水平。并以皮褶厚度法建立体脂率推测公式。结果对6～8岁骨龄段女性儿童正常组和超重组，BIA法与DEXA测量结果之间相关显著；日本长岭公式显著高估6～8岁骨龄段偏瘦组和正常组女性儿童的体脂率，姚兴家公式显著低估了超重组女性儿童的体脂率，而元田恒公式显著高估了3种体型女性儿童的体脂率；本研究得出皮褶厚度法推算体脂率公式为：全身体脂率=3.919＋0.715×髂嵴上部皮褶＋0.592×肱三头肌部皮褶。结论相对于以日本长岭公式、元田恒公式、姚兴家公式进行的皮褶厚度推算法，生物电阻抗手段更能有效测量6～8岁骨龄段女性儿童正常和超重群体体脂率；髂嵴上部和肱三头肌部皮褶厚度能联合评价6～8岁骨龄段女性儿童全身体脂率。

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猕猴掌骨和指骨长度性差

赵晓进王凤产田华香多甜

2017 (1): 99-102. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.017

摘要 ( )

PDF(240KB) ( )

目的探讨在1个猕猴种群中用掌骨和指骨的长度鉴定性别。方法采用直接测量法对11例雄性和25例雌性猕猴的掌骨和指骨长度进行测量。数据处理分析采用SPSS 20.0统计学软件。结果手骨的性别正确判别率从近侧掌骨到远侧指骨逐渐增加。5根掌骨和5根远节指骨长度的性别判别率分别是88.9%和100.0%，第1根手骨（包括1节掌骨和2节指骨）和第5根手骨（包括1节掌骨和3节指骨）总长度的性别判别率分别是90.3%和100.0%。因子分析结果显示，19根手骨形态分组是以排（掌骨、近节指骨、中节指骨和远节指骨）为单位，而不是以列（5根指骨）为单位。结论猕猴掌骨和指骨长度变量可以有效地识别性别，对非人灵长类的生物系统演化关系有一定的理论意义和应用价值。

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何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响

王建明孙静齐峰宋庆亮牛嗣云回陈红徐天戎贺飞

2017 (1): 30-36. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.006

摘要 ( )

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目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质（Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）蛋白表达的变化。方法选用10～20 d的幼年雄性 Wistar 大鼠，分离、培养Leydig 细胞，然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig 细胞衰老模型。实验分组：间质细胞衰老模型组，何首乌饮处理组，首乌丸处理组，正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig 细胞StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组（P<0.01)。另一方面，何首乌饮和何首乌丸干预组StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P<0.05)，何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞 StAR 和 P450scc 蛋白的表达，提高睾酮的合成能力，从而延缓Leydig 细胞衰老。

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人外周血细胞放射损伤相关基因的生物信息学

许优沁张庆芬张超

2017 (1): 37-42. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.007

摘要 ( )

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目的从基因水平揭示放射前后人外周血细胞的变化。方法从基因表达数据库（GEO）中下载两组经放射处理后人外周血基因芯片数据，利用Qlucore Omics Explorer 3.0 软件筛选差异表达基因，STRING、DAVID等在线分析工具对差异表达基因进行下一步的生物信息学分析。结果共筛选出94个共同差异表达基因，其中共同表达上调31个，共同表达下调11个，这些差异表达基因主要涉及到细胞凋亡的调控，细胞程序性死亡的调控，细胞死亡的调控，细胞周期的调控，DNA损伤应答，胞内信号转导等的分子功能及生物学过程。通过STRING分析，发现泛素C（UBC）、增殖细胞核抗原（PCNA）、鼠双微体基因-2（MDM2）处在核心节点位置，并参与p53通路。结论通过生物信息学的方法分析得出UBC、PCNA、MDM2可能成为潜在的防护放射后损伤的靶点。

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嵌合抗原受体修饰T细胞研究进展及肿瘤靶抗原的选择

唐海军刘玉琴

2017 (1): 115-120. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.021

摘要 ( )

PDF(245KB) ( )

嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T）是目前恶性肿瘤免疫治疗的一种新方法。CAR-T细胞对肿瘤的杀伤不依赖主要组织相容性复合体（MHC）,并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和突破宿主免疫耐受状态，因此，CAR-T细胞在治疗肿瘤方面具有独特的优势。CAR-T细胞的构建和选择合适的靶分子是CAR-T细胞免疫治疗的两个关键的问题，我们在文中将围绕这两个问题做一综述。

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白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响

唐凡人余萍萍王莉郭霜杨琴

2017 (1): 1-6. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.001

摘要 ( )

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目的探讨白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响。方法体外皮质神经元氧糖剥夺150min，复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和5μmol/L白藜芦醇预处理组。免疫荧光法鉴定神经元，细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定细胞活力，TUNEL法检测细胞凋亡，免疫荧光法和Western blotting检测微管相关蛋白2（MAP-2）和生长相关蛋白43（GAP-43）的表达,并计数神经元突起的长度和数目。结果培养细胞均高表达神经元特异性标记物MAP-2。白藜芦醇组细胞活力较对照组明显增加（0.551±0.009 比 0.436±0.013, P<0.01），而凋亡则明显降低（18.3%±1.3% 比35.3%±1.9%, P<0.01），上调MAP-2(0.790±0.102 比 0.462±0.063, P<0.01)和GAP-43(0.768±0.084 比 0.424±0.065,P<0.01)蛋白的表达，增加神经元突起的长度(89.510±6.939 比 61.538±9.14,P<0.01)和数目(6.347±1.002 比 3.040±0.608,P<0.01）。结论白藜芦醇预处理能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经元的损伤，促进神经元突起的生长。

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鸡源Wnt3a融合蛋白表达载体的构建及其对鸡胚脊髓神经前体细胞增殖和轴突形成的影响

李秋玲杨慈清张必超朱少义林俊堂

2017 (1): 7-13. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.002

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目的构建鸡源Wnt3a 融合蛋白真核表达载体 (pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP)，并探讨其在鸡胚脊髓发育过程中超表达后对神经前体细胞增殖及轴突形成的影响。方法利用分子生物学手段，提取鸡胚脊髓总RNA并获得Wnt3a片段，将其克隆到pCAG-MCs-EGFP载体中构建pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体。在鸡胚发育至2.5～3d (E2.5～E3) 时，利用鸡胚活体电转技术将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP（实验组）和pCAG-MCs-EGFP（对照组）质粒分别转入鸡胚脊髓，E4时取材切片，每组5个胚胎组织，采用免疫荧光染色技术检测Wnt3a和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达变化分析Wnt3a与细胞增殖间的关系，根据载体自发绿色荧光蛋白（GFP）观察脊髓神经前体细胞轴突生成情况。结果 pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体基因测序结果与Gene bank中基因序列一致，将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP导入鸡胚脊髓中发现绿色荧光。在脊髓组织切片水平上，免疫荧光染色结果表明，Wnt3a在鸡胚脊髓中能够超表达。Wnt3a超表达后，与对照组比较，含有轴突的神经元数量明显减少(n=3, P<0.01)，而PCNA 的表达量显著增加(n=3, P<0.01)。结论成功构建了鸡源性Wnt3a 融合蛋白真核表达载体，并证实Wnt3a在鸡胚发育过程中促进神经前体细胞的增殖并抑制轴突的形成。

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间歇性饥饿对亚硝酸钠所致大鼠海马神经细丝过度磷酸化及空间学习记忆损伤的改善作用

胡志红闫君宝李三强胡咏梅

2017 (1): 14-18. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.003

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目的探讨间歇性饥饿对亚硝酸钠诱导的大鼠海马神经细丝(NF)过度磷酸化及空间学习记忆的影响。方法 36只大鼠随机分为对照组、亚硝酸钠组、饥饿+亚硝酸钠组，每组12只。亚硝酸钠组大鼠饮亚硝酸钠水［水中溶入亚硝酸钠粉剂100 mg/(kg·d)］，正常喂食；饥饿+亚硝酸钠组大鼠饮亚硝酸钠水，采取饥饿2d，恢复喂食3d 的喂食方法，喂养60 d后通过Morris水迷宫实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力，免疫印迹和免疫组织化学方法检测大鼠海马NF磷酸化水平与分布。结果与对照组相比，亚硝酸钠组大鼠第2天至第7天的潜伏期［（53.34±5.28）s，(35.15±10.29)s，(23.52±9.50)s，(14.49±8.70)s，(16.87±8.77)s，(12.31±7.12）s］明显大于对照组［（31.24±8.53)s，(12.41±6.54)s，(10.49±6.43)s，(8.61±2.56)s，(7.25±2.12)s，(6.03±1.92）s］（P<0.01或P<0.05），跨越平台的次数（1.18±0.82）明显小于对照组（3.96±0.54,P<0.05）；饥饿+亚硝酸钠组只有大鼠第2天至第3天的潜伏期［（43.61±1.76)s，(25.25±7.49）s］大于对照组（P<0.05），第4天至第7天的潜伏期［（19.47±8.30)s，(10.77±6.28)s，(12.05±7.49)s，(10.29±7.52）s］与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。免疫印迹和免疫组织化学结果显示，亚硝酸钠导致海马NF的磷酸化水平升高，而饥饿+亚硝酸钠组与对照组相比无明显变化。结论饥饿处理可改善亚硝酸钠导致的大鼠海马神经细丝过度磷酸化及空间学习记忆损伤。

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线粒体转录终止因子蛋白家族的表达以及在MPTP / MPP⁺ 诱导下的表达变化

张林冰韩艳艳仇石许珊左伋刘雯

2017 (1): 19-24. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.004

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目的探讨线粒体转录终止因子（MTERFs）蛋白家族在组织和细胞中的表达以及在神经毒素MPTP/MPP⁺诱导下的表达变化。方法取正常C57BL小黑鼠的脑、肝、肾组织，以及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、人心肌细胞HCM、人肝细胞L-02，检测MTERFs的蛋白表达情况；通过MPTP/MPP⁺构建帕金森病（PD）动物/细胞模型，检测MTERFs的蛋白表达变化情况。结果 MTERFs在小鼠脑中和SH-SY5Y细胞中蛋白表达水平较高；MPTP/MPP⁺ 诱导的PD模型中，MTERF3蛋白表达水平明显降低。结论在小鼠脑和SH-SY5Y细胞中，MTERFs表达较高；MPTP/MPP⁺诱导下MTERF3蛋白表达明显降低，影响了线粒体转录水平，这可能参与了帕金森病发生的过程。

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微小RNA-181b通过调节热休克蛋白A5在缺血性脑卒中小鼠中的作用

彭志锋

2017 (1): 25-29. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.005

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目的探讨微小RNA-181b（miR-181b）在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中的作用及机制。方法采用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤；Real-time PCR检测miR-181b mRNA表达情况；蛋白印迹观察miR-181b靶蛋白热休克蛋白A5 (HSP A5)蛋白水平变化情况；Nissl方法检测皮层缺血神经元的缺失情况；行为学方法评估小鼠的神经行为学功能损伤程度。结果侧脑室注射miR-181b拮抗剂可使脑内miR-181b表达水平明显降低(P<0.05，n=3)；MCAO后小鼠的神经行为学功能受到严重损伤，miR-181b拮抗剂可明显缓解这些行为学改变(P<0.05，n=6)；下调miR-181b可以提高HSPA5蛋白水平(P<0.05, n=3)； MCAO后小鼠皮层有一定程度的神经细胞缺失，预先给予miR-181b拮抗剂发挥保护作用，神经细胞缺失减少(P<0.05，n=3)。结论 miR-181b可能通过调节HSPA5蛋白的表达在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中发挥重要作用。

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