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    神经生物学
    髓样细胞激活受体2调控氧糖剥夺/复氧模型小鼠小胶质细胞向M2型极化
    胥虹贝 罗勇
    2021 (3):  329-336.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.001
    摘要 ( )   PDF(6868KB) ( )  
    目的 探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制。  方法  体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型。将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、OGD/R+LV-scramble组和OGD/R+LV-TREM2组。Real-time PCR检测TREM2 mRNA在OGD/R 组细胞复氧72 h内表达情况。免疫荧光染色观察慢病毒LV-scramble 和LV-TREM2在正常N9小胶质细胞内转染情况,Real-time PCR和Western blotting验证慢病毒转染效率,Real-time PCR和ELISA检测小胶质细胞M1型标志物肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及M2型标志物精氨酸酶 1(Arg-1)和IL-10 mRNA 和蛋白表达情况。Western blotting检测磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-ⅠκBα)和ⅠκBα蛋白含量,免疫荧光分析核因子κB P65(NF-κB P65)蛋白在细胞内分布情况。  结果 复氧72 h内,OGD/R 组细胞TREM-2 mRNA含量明显增加,高峰位于24 h和48 h;慢病毒LV-TREM2可有效促进OGD/R组细胞TREM2 mRNA和蛋白表达(P<0.001,P<0.01)。与OGD/R组相比,OGD/R+LV-TREM2组TNF-α、IL-1β和iNOS mRNA和蛋白明显降低,而Arg-1和IL-10 mRNA和蛋白含量明显升高(P<0.05);此外,OGD/R+LV-TREM-2组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显升高(P<0.05),p-ⅠκBα/ⅠκBα比值显著下降(P<0.001),且NF-κB P65蛋白核转位明显被削弱。  结论  TREM-2过表达可促进OGD/R 模型小胶质细胞向M2型转化从而发挥抗炎作用,该作用与TREM-2调控小胶质细胞PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。
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    穴位埋线抑制血管性痴呆大鼠神经炎症反应
    朱世杰 孙秋颖 唐中生 罗亚非 谢高宇 吴春朋 寇云芳 范瑞娟
    2021 (3):  337-343.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.002
    摘要 ( )   PDF(5236KB) ( )  
    目的  观察穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠环氧化酶2 (COX-2)/前列腺素E2 (PGE2)信号通路中炎症因子表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑部神经炎性反应抑制作用的机制。   方法  采用改良Pulsinelli’s 4血管阻断法建立VD模型,148只雄性SD大鼠随机分为VD模型组、非穴位埋线组、穴位埋线组,另设置假手术组为对照。术后第7天2个治疗组分别施行穴位埋线和非穴位埋线治疗,15 d后取材。Western blotting检测COX-2和PGE2的表达;Real-time PCR检测大鼠海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素(IL)-6、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)、IL-1β和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达。   结果  与假手术组相比,其他3组大鼠海马组织COX-2、PGE2、TNF-α、ICAM-1、IL-6、MIP-2、IL-1β和MCP-1因子的表达均显著性升高(P<0.01)。与模型组相比,穴位埋线组和非穴位埋线组海马组织COX-2、PGE2蛋白及TNF-α、ICAM-1、IL-6、MIP-2、IL-1β和 MCP-1 mRNA表达均下降(P<0.01),且穴位埋线组下降最为明显(P<0.01)。  结论  穴位埋线可通过下调 COX-2/PGE2信号通路中相关炎症因子的表达,降低VD大鼠引起的炎症反应,起到保护脑炎免受损伤的作用。
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    宫内缺氧减缓小鼠普肯耶细胞发育和降低小脑肽的表达
    徐纪伟 杨常青 陈小平 陈旭东 范文娟
    2021 (3):  344-351.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.003
    摘要 ( )   PDF(15889KB) ( )  
    目的  探讨宫内缺氧对出生后小鼠普肯耶细胞的发育及小脑肽表达的影响。   方法  20只健康成年昆明小鼠孕鼠随机分为2组:对照组与缺氧组,每组10只。自母鼠孕14 d时开始,将缺氧组的母鼠置入动物缺氧箱内,制作宫内缺氧动物模型。待母鼠分娩后,实验动物分为缺氧组和对照组,每组内有出生当日(P0)、P5、P9、P14、P21和P30这 6个年龄段,每年龄段小鼠各取5只。取小脑组织做振荡切片,利用免疫荧光技术检测钙结合蛋白(calbindin)阳性普肯耶细胞的发育变化,利用小脑肽1(CBLN1)、CBLN4与calbindin双重标记的方法检测普肯耶细胞突起上小脑肽的表达。利用Western blotting对各组各时间点动物小脑组织内小脑肽蛋白表达进行半定量分析。   结果  与同龄对照组相比,缺氧组小脑普肯耶细胞数量减少,树突分支减少且排列混乱,皮质内CBLN1与CBLN4的表达明显降低。Western blotting结果与免疫荧光结果吻合。  结论  宫内缺氧导致小脑普肯耶细胞发育异常以及突触改变。
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    海马小胶质细胞在小鼠慢性炎性痛所致负性情绪中的形态变化
    李威 刘志文 曾佳玉 曾学晴 袁婧 钟小林 万炜
    2021 (3):  352-357.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.004
    摘要 ( )   PDF(2183KB) ( )  
    目的  探讨完全弗氏佐剂(CFA)所致慢性炎性痛小鼠模型情绪及海马小胶质细胞形态的改变。   方法  32只ICR雄性小鼠随机分成生理盐水对照组(NS)和完全弗氏佐剂组(CFA)。右后爪足底注射CFA建立小鼠慢性炎性痛模型。采用Von Frey纤维针测量小鼠右足底注射CFA后机械痛阈的变化;采用旷场实验检测小鼠活动度和焦虑样行为;采用糖水偏好和被迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测小鼠海马小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白抗原(IBA-1)的表达;采用Sholl分析方法分析海马齿状回区小胶质细胞形态变化。   结果  小鼠痛阈评分结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠机械痛阈明显下降(P<0.05)。行为学结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠旷场中央格停留时间减少(P<0.01),糖水偏好百分比下降(P<0.01),被迫游泳实验不动时间增加(P<0.001)。免疫组织化学结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马齿状回区小胶质细胞数目明显增多(P<0.001)。Sholl分析结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马齿状回区小胶质细胞交点数目减少(P<0.05)。   结论  在CFA诱导的慢性炎性痛模型中,小鼠的负性情绪可能与海马小胶质细胞形态改变有关。
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    磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/FoxO1信号通路和白细胞介素17在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的表达变化
    李倩 高杰 胡蓉 韩锋 李红 苏敏
    2021 (3):  358-364.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.005
    摘要 ( )   PDF(8136KB) ( )  
    目的  探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/FoxO1和白细胞介素17(IL-17)与自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的相关机制。  方法  将C57BL/6小鼠60只随机分为对照组和模型组(EAE),每组30只。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35~55)联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。观察各组小鼠的行为学评分,并于评分4分时取各组小鼠的脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾细胞在体外用a-CD3和MOG35~55分别刺激7 d,收集其上清液,ELISA检测小鼠脾细胞上清液和血清中细胞因子白细胞介素17(IL-17)和干扰素γ(IFN-γ)的含量;流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+IL 17+细胞的百分比;Western blotting检测IL-17及PI3K/Akt/FoxO1在小鼠脊髓中表达。   结果  与对照组相比,EAE组小鼠行为学评分明显高于对照组(P<0.05);HE染色及Luxol fast blue染色结果显示,EAE组脊髓病理组织表现出炎性浸润和髓鞘脱失显著增多(P<0.05)。 ELISA结果显示,EAE组血清中及体外培养脾细胞的上清中IL-17和IFN-γ的含量明显升高。流式结果表明,EAE组小鼠脾细胞中CD4+IL 17+T细胞的百分比明显增加(P<0.05)。Western blotting 结果显示,EAE组小鼠脊髓IL-17、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平明显升高,但磷酸化FoxO1(p-FoxO1)蛋白水平显著降低(P<0.05)。   结论  EAE组小鼠脊髓中促炎因子IL-17分泌增加,可能与PI3K/Akt/FoxO1信号通路活化进而激活T细胞功能有关。
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    上调锌指和含BTB 域20表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的影响
    王月静 张萌 郎尉雅 张海燕 廉洁 冯化杰 孙丽慧
    2021 (3):  365-369.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.006
    摘要 ( )   PDF(3917KB) ( )  
    目的  探讨上调锌指和含BTB域20(A20)表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆影响及其对海马神经元凋亡的抑制作用。    方法  将APPswe/PSE9转基因小鼠40只 分为4组,分别为对照组、AD组、干扰小RNA(siRNA)-AD组和A20-AD组。选择携带高表达A20的腺病毒为干扰药物,采用Morris水迷宫实验观察小鼠空间学习记忆能力,采用Westren blottong技术检测A20的表达,采用免疫组织化学法观察各种小鼠海马CA1区P53表达情况。  结果  与AD组比较,A20-AD组小鼠学习记忆功能有所改善,海马CA1区神经元凋亡率显著降低,海马CA1区P53表达显著降低。   结论  上调A20表达能提升APPswe/PSE9转基因小鼠学习记忆能力,可使APPswe/PSE9转基因小鼠海马CA1区P53表达降低。
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    依达拉奉干预永久性脑缺血大鼠神经干细胞增殖及分化
    梁晓艳 顾玉 赵梦 杜鑫 刘宏伟 周洋 张铁军
    2021 (3):  370-376.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.007
    摘要 ( )   PDF(6238KB) ( )  
    目的  探讨依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内内源性神经干细胞的影响。   方法  采用电凝法建立大鼠永久性脑缺血模型。将30只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组与依达拉奉组,每组10只,模型制作成功后6 h,1.5 g/L依达拉奉组腹腔注射依达拉奉(10 ml/kg),每天1次,假手术组与脑缺血组腹腔注射等体积的生理盐水,连续注射7 d。末次给药后24 h,免疫荧光染色观察损伤侧脑室下区与缺血周围脑皮质区BrdU标记阳性细胞、Nestin/BrdU标记阳性细胞、神经元Ⅲ型β-微管蛋白(Tuj1)/BrdU标记阳性细胞与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/BrdU标记阳性细胞,Western blotting 检测缺血周围脑皮质区Tuj1与GFAP蛋白表达。   结果  与脑缺血组比较,依达拉奉组损伤侧脑室下区与缺血周围脑皮质区的BrdU标记阳性细胞、Nestin/BrdU标记阳性细胞、Tuj1/BrdU标记阳性细胞与GFAP/BrdU标记阳性细胞明显增加(P<0.05)。与脑缺血组比较,依达拉奉组缺血周围脑皮质区的Tuj1与GFAP蛋白表达量增加(P<0.05)。   结论  依达拉奉可促进缺血损伤侧脑室下区与缺血周围脑皮质内源性神经干细胞与星形胶质细胞的增殖,促进内源性神经干细胞分化为神经元。
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    医学教育
    3D打印模型在人体胚胎学实验教学翻转课堂中的应用
    曹馨元 刘润竹 张翰林 陈咏梅 徐园园 钱晓菁 仇文颖
    2021 (3):  479-484.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.023
    摘要 ( )   PDF(1550KB) ( )  
    目的 探讨3D打印模型应用在人体胚胎学实验教学翻转课堂中的教学效果。   方法  将临床医学8年制76名学生随机分为两组:实验组在课前对胚胎3D模型进行预习,并在课上为全体学生讲授;对照组课前不进行胚胎模型的预习。实验课前后各进行1次胚胎知识测验和问卷调查,比较两组学生知识掌握和自我评价的差异。   结果  在自我评价方面,实验组学生在讲述病因和解释过程方面的自我评价在授课后有显著提高(均P<0.05),对照组学生在辨认结构、理解知识、讲述病因、解释过程方面的自我评价均有显著提高(P均<0.05)。在知识测验成绩方面,实验组和对照组学生授课后的成绩高于授课前的成绩(均P<0.05)。对照组知识测验的成绩提升显著高于实验组(P<0.05)。第1次实验前后两组成绩差异不显著,第2次实验前后两组成绩差异显著。在错题原因反思中,70.27%的学生都认为自己在知识掌握方面还有欠缺,英语名词的理解(15.54%),心理因素(5.41%)和其他因素(8.78%)也造成了学生知识测验的失分。   结论  3D打印模型在人体胚胎学实验教学翻转课堂中的应用能够有效提高教学效果,在胚胎学教学改革中应予以重视。
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    病例引导的翻转课堂在神经解剖学混合式教学中的应用
    孟海伟 丁兆习 冯蕾 刘真 汤煜春 刘树伟
    2021 (3):  485-488.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.024
    摘要 ( )   PDF(821KB) ( )  
    目的  探讨病例引导的翻转课堂在神经解剖学混合式教学中的效果。   方法  随机选取2019级临床医学专业5年制两个班学生(n=51),在神经系统的学习中应用病例引导的翻转课堂进行教学,通过调查问卷分析同学对这种教学方式的满意度,通过学习成绩分析教学效果。   结果  调查问卷结果显示,实验组绝大部分同学赞同这种教学模式,总体支持度为98.04%;考试成绩分析结果显示,实验组的总成绩平均分为77.42±1.59,期末成绩中神经系统部分成绩为31.31±1.26,均显著高于对照组,且实验组考试成绩中80分及90分以上的人数也明显高于对照组(P<0.05)。   结论  病例引导的神经解剖学教学有利于调动学生的学习积极性,能提高学生自主分析运用知识的能力和学习效果。
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    组织学胚胎学发育生物学
    当归内酯联合消渴丸对糖尿病肾病大鼠肾脏保护及血管内皮生长因子信号通路的调节作用
    郭杨志 杜娟 姜敏
    2021 (3):  439-445.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.017
    摘要 ( )   PDF(10851KB) ( )  
    目的  探讨当归内酯联合消渴丸对糖尿病肾病大鼠血糖调节、肾脏保护及其体内血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的调节作用。  方法  75只大鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、消渴丸组、当归内酯组、当归内酯联合消渴丸组,每组15只。除对照组外,其余大鼠建立糖尿病肾病大鼠模型,消渴丸组、当归内酯组、当归内酯联合消渴丸组分别灌胃给予大鼠消渴丸(0.8 g/kg)、当归内酯(20 mg/kg)、消渴丸(0.8 g/kg)联合当归内酯(20 mg/kg),每日给药1次,连续8周后,测定大鼠24 h尿蛋白量、空腹血糖及餐后血糖水平、糖化血清蛋白及糖化血红蛋白水平、空腹胰岛素水平及胰岛素敏感指数、血肌酐(SCr)及血尿素氮(BUN)水平,Real-time PCR检测大鼠胰岛组织胰岛素(INS)及葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA水平, HE染色检测大鼠肾脏组织病理学变化,Western blotting及免疫组织化学检测大鼠肾脏VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)水平。 
      结果  与模型组相比,当归内酯联合消渴丸大鼠24 h尿蛋白量、空腹血糖及餐后血糖水平、糖化血清蛋白及糖化血红蛋白水平、空腹胰岛素水平、SCr及BUN水平、肾脏组织VEGF、VEGFR2蛋白水平及相对积分吸光度均明显降低(P<0.05),胰岛素敏感指数、胰岛组织INS及G6Pase mRNA水平明显升高(P<0.05),差异有统计学意义,同时糖尿病肾病大鼠肾脏组织病理学明显改善。   结论  当归内酯联合消渴丸能够降低糖尿病肾病大鼠血糖水平,同时改善大鼠肾功能及病理变化,其机制可能与调节VEGF信号通路有关。
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    孕期雌鼠摄入超量咖啡因对胎鼠软骨内骨化的影响及其机制
    刘侃 王秋明 史许锋 陶涛 王焕萍 武海英
    2021 (3):  453-459.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.019
    摘要 ( )   PDF(12530KB) ( )  
    目的 探讨孕期雌鼠摄入超量咖啡因对胎鼠软骨内骨化的影响及其分子机制。  方法  在孕第9~20 天,咖啡因暴露组Wistar孕鼠每天灌胃120 mg/kg咖啡因,对照组灌胃相同体积的蒸馏水。将孕20 d的孕鼠脱颈处死,取出胎鼠,测量两组胎鼠体长;分离胎鼠股骨远端,测量股骨远端软骨长度,并制备原代软骨细胞,分别用咖啡因(0.1、1和10 μmol/L)、胰岛素样生长因子1(IGF-1,100 μg/L)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂(10 μmol/L)进行处理,收获细胞进行凋亡、mRNA和蛋白质分析。   结果  与对照组相比,咖啡因暴露组胎鼠的体长和股骨长均显著下降(P<0.05),血清皮质酮水平显著提高(P<0.05)。咖啡因暴露组胎鼠软骨细胞肥大区的IGF-1、增殖细胞核抗原(PCNA)和性别决定区Y框蛋白9 (SOX9)表达均较对照组显著降低(P<0.05)。在体外实验中,咖啡因处理以剂量依赖性的方式降低了原代软骨细胞中IGF-1、PCNA、SOX9 mRNA和p-ERK蛋白表达,外源性-IGF-1 则能逆转咖啡因诱导的这些变化,而外源性IGF-1的作用则被ERK抑制剂降低(均P<0.05)。   结论  产前咖啡因暴露通过抑制软骨细胞增殖导致胎鼠股骨远端变短,软骨细胞肥厚区延长。软骨细胞中的IGF-1/MAPK/ERK信号通路可能部分参与咖啡因对软骨细胞增殖的不利影响。
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    多肽类化合物Urantide对动脉粥样硬化大鼠心脏组织中骨桥蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达的影响
    李英 谢利德 王途 赵娟
    2021 (3):  446-452.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.018
    摘要 ( )   PDF(16382KB) ( )  
    目的  观察Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠心脏组织中骨桥蛋白(OPN)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其防治大鼠心肌纤维化损伤的作用机制。   方法  选取120只3周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠,高脂饲料饲养及腹腔注射维生素D3(Vit D3)的方法建立AS大鼠模型,按照随机化原则分为:对照组、AS模型组、辛伐他汀组、Urantide(3 d、7 d、14 d)组。采用HE和Masson三色染色法观察大鼠心脏组织形态和胶原纤维表达情况,免疫组织化学和Western blotting检测大鼠心脏组织OPN和α-SMA蛋白表达情况。   结果  AS模型组大鼠心脏组织中出现心肌细胞肥大或萎缩、大量炎性细胞浸润和少量泡沫细胞等病理变化;心脏组织胶原纤维增多及OPN和α-SMA蛋白表达水平较对照组显著升高。与AS模型组相比,经Urantide治疗后心脏组织损伤明显改善,胶原纤维和OPN及α-SMA蛋白表达水平降低。   结论  Urantide可以抑制AS大鼠心脏组织中OPN和α-SMA蛋白表达,缓解心肌纤维化,同时保护AS大鼠的心肌组织。
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    细胞和分子生物学
    大鼠肝再生启动阶段能量代谢物靶向定量分析
    杨晖 徐存拴
    2021 (3):  377-383.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.008
    摘要 ( )   PDF(2736KB) ( )  
    目的 探讨大鼠肝再生 (LR)启动阶段能量代谢物的变化对LR的调控作用。   方法  大鼠随机分为3组,每组5只,包括两个部分肝切除组(PH)和1个正常对照组。运用质谱选择反应检测扫描/多反应检测扫描(SRM/MRM)对29种能量代谢物的含量进行靶向代谢组学鉴定。运用Ingenuity Pathway Analysis (IPA)软件进行整合分析,包括经典途径和分子相互作用网络。   结果  3-磷酸-D-甘油酸酯、一磷酸腺苷、环腺苷酸、D-果糖1,6-二磷酸、磷酸二羟丙酮、单磷酸鸟苷、三磷酸鸟苷、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸含量显著增加。α-酮戊二酸、β-D-果糖6-磷酸、枸橼酸、D-葡萄糖-6-磷酸、乳酸、还原型辅酶Ⅱ、草酰乙酸和丙酮酸含量显著减少。聚类分析发现,这些代谢物可以聚为4类。IPA分析表明,肝再生起始阶段的生物分子变化主要与碳水化合物代谢,细胞生长和增殖,机体发育相关。在肝再生启动阶段,磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、蛋白激酶A(PKA)和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路与能量代谢相关,糖酵解可能是主要的供能方式。   结论  大鼠肝再生启动阶段能量代谢物的变化对肝再生具有调控作用。
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    Copine-3-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白在细胞中的表达和定位
    李游 徐丽明 张琦敏 杨素芳 卢春花
    2021 (3):  384-390.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.009
    摘要 ( )   PDF(11725KB) ( )  
    目的  构建增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-N1-CPNE3真核表达载体,检测Copine-3蛋白在细胞中的表达和定位。   方法  利用RT-PCR从人支气管上皮细胞(HBE)中扩增得到编码Copine-3蛋白的CPNE3基因,并亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体。将酶切鉴定和测序正确的pEGFP-N1-CPNE3重组质粒转染293T和H1299细胞。激光扫描共焦检测Copine-3-EGFP融合蛋白的细胞定位,Western blotting检测亚细胞组分中Copine-3蛋白的表达,免疫组织化学检测肺腺癌患者癌临床样品中的Copine-3蛋白定位。   结果  编码Copine-3蛋白的CPNE3基因克隆到了pEGFP-N1真核表达载体中,并在293T和H1299细胞中表达。通过免疫荧光染色、Western blotting和免疫组织化学确定Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。   结论  成功构建pEGFP-N1-CPNE3真核表达载体,Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。
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    小鼠心肌肥厚枢纽基因的筛选与鉴定
    史卓 李家慧 高静 董艳莉 任甫 文普帅
    2021 (3):  391-397.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.010
    摘要 ( )   PDF(6956KB) ( )  
    目的  通过生物信息学分析结合生物学实验,筛选和鉴定与心肌肥厚密切相关的枢纽基因。   方法 从基因表达数据库(GEO)下载小鼠心肌肥厚相关芯片数据,利用GEO2R在线工具筛选差异表达基因;利用DAVID 6.7、String 11.0和Cytoscape 3.7.0软件对差异基因进行分析;昆明小鼠随机分为生理盐水组(n=6)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)组(n=6),建立心肌肥厚模型,通过Real-time PCR方法检测枢纽基因在Ang Ⅱ诱导的昆明小鼠心肌肥厚模型中的表达。   结果  筛选出共有差异表达基因202个,枢纽基因12个;Real-time PCR结果显示核心蛋白聚糖(Dcn)、HADHA和热休克蛋白(HSP)90αA1在AngⅡ组中表达明显下调。   结论 筛选出的枢纽基因可以通过细胞外基质和转化生长因子β(TGF-β)影响昆明小鼠心肌肥厚的发生发展。
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     神经元素3过表达对诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响
    孔吟皓 徐龙飞 王琪 韩晶 洪艳
    2021 (3):  398-404.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.011
    摘要 ( )   PDF(11008KB) ( )  
    目的  探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化。  方法  分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs,该过程包括低糖诱导和高糖诱导两阶段共21 d;实验分为两组,对照组仅进行分阶段诱导,实验组在分阶段诱导第6天感染载有目的基因Ngn3的慢病毒过表达载体,感染完成后继续诱导;电子显微镜观察诱导前、后细胞结构变化;两组细胞诱导完成后收集mRNA和蛋白质,通过Real-time PCR和Western blotting法比较诱导后两组细胞的胰岛素和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)表达情况;收集诱导中后期培养基上清液,ELISA测定C肽含量。   结果  成功分离HUCMSCs,细胞阳性表达CD105、CD90,阴性表达CD34、CD45,具有成脂、成骨分化能力;通过分阶段诱导将HUCMSCs向IPCs诱导,细胞阳性表达Mafa和胰岛素;实验组在诱导过程中成功过表达Ngn3;电子显微镜观察显示,实验组诱导细胞结构更为成熟;实验组IPCs胰岛素和Mafa的表达量明显高于对照组;诱导过程中实验组细胞分泌的C肽量高于对照组。   结论  慢病毒介导的Ngn3过表达提高了HUCMSCs向IPCs的诱导分化效率。
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    综述
    Nogo在心脏中的分布及其在心血管疾病中的作用
    张苏欣 孙艳荣 王文娟 孙昊哲 胡耀文 秦丽华
    2021 (3):  495-498.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.026
    摘要 ( )   PDF(836KB) ( )  
    Nogo作为网状蛋白家族成员,主要参与组织损伤后再生、细胞凋亡和肿瘤生长等过程。心血管疾病是目前威胁人类健康的主要疾病之一。近年来关于Nogo在心血管系统的研究愈加广泛,在心肌纤维化、心肌细胞凋亡和血管重塑等病理过程中Nogo表达的变化提示其可能发挥一定的作用。本文中我们就Nogo在心脏中的分布及心血管疾病中作用作一综述,以揭示其在心血管疾病中可能的作用与机制。
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     Nogo-B受体在恶性实体肿瘤发病中的抑制和促进作用
    苏昊 任捷 秦丽华
    2021 (3):  489-494.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.025
    摘要 ( )   PDF(1587KB) ( )  
    Nogo-B是网状蛋白家族4的重要成员,广泛表达于中枢神经系统及外周组织。研究显示,Nogo-B能与Nogo受体1(NgR1)、Nogo-B特异性受体(NgBR)和配对免疫球蛋白样受体B(PirB)3种不同的受体结合,受体通过RhoA/Rho相关蛋白激酶(ROCK)、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、磷酸腺苷活化激酶α/肝X受α(AMPAα/LXRα)、细胞外信号调节激酶(ERK)、上皮-间质转化(EMT)以及未折叠蛋白反应(UPR)等多个信号通路,在血管生成、增殖和凋亡以及侵袭和迁移等肿瘤发生和发展过程中发挥抑制和促进的双重作用。了解Nogo-B受体参与肿瘤发病的机制将会为治疗药物的开发提供新的思路。我们将对Nogo-B及其受体的基本结构和表达以及Nogo-B受体信号通路在恶性实体肿瘤发生和发展中的抑制和促进作用等方面的最新研究进展做一简要综述。
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    人类学
    血清血管紧张素转换酶和血管紧张素原水平与妊娠高血压综合征的相关性及其危险因素
    王茹 庄文婷 王香林 李红荣 李长兴 孔德霞 李建华
    2021 (3):  460-464.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.020
    摘要 ( )   PDF(870KB) ( )  
    目的  探讨血清中血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素原 (AGT)与妊娠期高血压综合征(HDCP)的相关性及HDCP发病的危险因素。   方法  选择135例妊娠高血压患者(HDCP组)和100例正常孕妇(CK组),用ELISA法检测各组的血清ACE、AGT水平,并进行相关性分析;抽取两组孕产妇的年龄、怀孕天数、孕前体质量指数(BMI)、产次、产检次数、高血压糖尿病家族史、文化程度等一般资料,对孕产妇患HDCP的危险因素进行单因素分析,将单因素回归分析中有统计学意义的因素进行多因素 Logistic 回归分析。   结果  HDCP组血清ACE水平(90.49±47.65)μg/L明显高于CK组(58.72±27.58)μg/L,P<0.05,差异有统计学意义;HDCP组血清AGT水平(64.57±19.71)μg/L高于CK组(58.22±18.64)μg/L,P>0.05,差异无统计学意义;单因素分析结果显示,年龄、BMI、高血压、糖尿病家族史、ACE水平是孕产妇患HDCP的危险因素(P<0.05),怀孕天数、产次、产检次数、文化程度比较差异无统计学意义(P>0.05);多因素分析显示:年龄、BMI、高血压糖尿病史、ACE水平是妊娠性高血压的危险因素。  结论  ACE水平与HDCP有关,AGT水平与HDCP无关;年龄大、BMI值高、有高血压糖尿病史者,ACE水平增高发生妊娠高血压综合征的风险增加。
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    湖南侗族成人的Heath-Carter体型特征
    张惠娟 王奕茗 廖伟程 陈希雯 覃大保 黄大元
    2021 (3):  465-472.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.021
    摘要 ( )   PDF(1172KB) ( )  
    目的  探讨湖南农村侗族成人的体型特征。   方法 采用Heath-Carter体型测量法,对749名(男性304人,女性445人)湖南农村侗族成人的体型进行评价。   结果 侗族男性平均体型为内胚层-中胚层均衡体型(4.83-4.95-1.80),女性为偏中胚层的内胚层体型(6.09-4.68-1.37)。随年龄增长,男性内因子值逐渐下降,女性内因子值和男、女性中因子值均先上升后下降;外因子值男、女性均先下降后上升。各年龄组男性内因子值明显低于女性,多个年龄组男性的中、外因子值明显高于女性;与其他族群比较,湖南侗族内因子值大、中因子值较小,外因子值处于中等水平。   结论  湖南侗族成人皮下脂肪厚,骨骼、肌肉不发达,线性度处于中等水平,其体型与江苏汉族、福建汉族和辽宁汉族接近。
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    运动与绝经后女性骨强度、体成分及性激素的关系
    叶蓁蓁 易剑锋 潘建西
    2021 (3):  473-478.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.022
    摘要 ( )   PDF(884KB) ( )  
    目的  探讨运动对兰州市汉族绝经后女性骨强度、体成分及性激素的影响。   方法  2018年1月~2019年6月,采用随机整群抽样选取兰州市汉族绝经后女性233例(运动组110例,非运动组123例),采用超声骨密度仪、生物电阻抗分析仪及电化学发光全自动免疫分析仪,分别测量跟骨骨强度、体成分和性激素。   结果  兰州市汉族绝经后运动组女性的体重、体质量指数及脂肪组织体成分均低于非运动组(P<0.05);骨强度、雌二醇及肌肉组织体成分均高于非运动组(P<0.01)。绝经后运动组女性骨质疏松低于非运动组(P<0.01)。Pearson 相关分析显示,绝经后女性的骨强度与雌二醇和肌肉组织体成分成正相关(P<0.01),与脂肪组织体成分成负相关(P<0.01)。Logistic 回归分析显示,四肢肌肉量和雌激素是绝经后非运动女性骨质的保护性因素,内脏脂肪含量是骨质异常的危险因素;雌激素是经后运动女性骨质的保护性因素。   结论  肌肉与脂肪共同决定着绝经后女性的骨强度,且两者关系受运动状况的影响。运动通过促雌激素生成,增加四肢肌肉量及降低内脏脂肪含量,有效防控兰州市汉族绝经后女性骨质疏松的发生。
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    细胞和分子生物学
    微小RNA-4286调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型对胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭的影响
    刘东涛 杨志娟 丁波 马俊文
    2021 (3):  405-409.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.012
    摘要 ( )   PDF(3425KB) ( )  
    目的  探讨微小RNA-4286(miRNA-4286)调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)对胃癌细胞系NGC-27生长、迁移及侵袭的影响。   方法  将胃癌HGC-27细胞分为空白对照组和阴性对照组、干预组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染pEGFP-N1质粒,干预组转染pEGFP-N1-miRNA-4286质粒,采用Real-time PCR检测3组胃癌HGC-27细胞miRNA-4286表达量,采用Western blotting检测3组胃癌HGC-27细胞中INPP4A蛋白表达量,采用八肽胆囊收缩素(CCK8)法检测3组胃癌HGC-27细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭实验检测3组胃癌HGC-27细胞侵袭能力,采用划痕实验检测3组胃癌HGC-27细胞迁移能力。   结果  干预组miRNA-4286表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);干预组INPP4A蛋白表达量、划痕伤口愈合间距明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);阴性对照组miRNA-4286表达量、INPP4A蛋白表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数、划痕伤口愈合间距较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。   结论  MiRNA-4286可能通过下调INPP4A表达而促进胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭。
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    小泛素样修饰蛋白1假基因3通过蛋白激酶B信号通路影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖和凋亡
    徐亮 杨剑烨 杨飞燕 杨国彪
    2021 (3):  410-417.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.013
    摘要 ( )   PDF(9132KB) ( )  
    目的  探讨长链非编码RNA(lncRNA) 小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响。   方法  用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化。在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA(siRNA),Real-time PCR方法测定下调效果, MTT法和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖, PI单染法测定细胞周期,膜联蛋白 V-FITC(annexin V-FITC)/PI法检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测剪切的Caspase-3(c-Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P27、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。Akt信号激活剂处理转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、凋亡和周期变化。样本数均为9。   结果  SUMO1P3在非小细胞肺癌细胞中表达上调。转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞中SUMO1P3表达水平降低,细胞增殖能力下降,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中c-Caspase-3和P27蛋白水平升高,cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白水平下降。Akt信号激活剂可以逆转SUMO1P3 siRNA对H1299细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。   结论  下调SUMO1P3抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与降低Akt信号通路激活水平有关。
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    肿瘤生物学
    结直肠癌内脂素、 hsa-miR-199a、细胞外信号调节蛋白激酶1/2的表达及临床意义
    刘婷 于秀文 刘得水 徐晨 李雪松 荣玮
    2021 (3):  418-424.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.014
    摘要 ( )   PDF(5578KB) ( )  
    目的  探讨结直肠癌(CRC)组织中内脂素(visfatin)、hsa-miR-199a(miR-199)和细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的表达及三者的相关性。   方法  Real-time PCR检测2017年1月~2017年12月期间在齐齐哈尔医学院临床病理诊断中心进行临床病理检验的根治性切除原发结直肠癌64例visfatin mRNA 和hsa-miR-199a的表达水平,免疫组织化学法和Western blotting检测visfatin和ERK1/2蛋白表达水平,按visfatin和ERK1/2蛋白表达程度分组,比较各组hsa-miR-199a相对表达量。   结果  结直肠癌组织(观察组,64例)中visfatin 基因水平和蛋白水平均高于正常结直肠组织(对照组),表达具有一致性;结直肠癌组织(观察组,64例)中hsa-miR-199a的相对表达量低于正常结直肠组织(对照组)与visfatin mRNA成显著负相关;ERK1/2的结直肠癌组织(观察组)表达高于正常结直肠组织(对照组)与visfatin成显著正相关。Visfatin、ERK1/2蛋白表达阳性组,hsa-miR-199a相对表达量与检验变量比较差异具有显著性(P<0.05)。   结论  结直肠癌visfatin过表达影响hsa-miR-199a的下调且与ERK信号通路有关。
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    SOX4在子宫内膜癌组织中的表达及其生物学作用
    刘佳淑 范波 黄锦 刘胜凤
    2021 (3):  425-431.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.015
    摘要 ( )   PDF(6924KB) ( )  
    目的  探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)在子宫内膜癌组织中的表达水平及其生物学作用。   方法  收集156例子宫内膜癌组织和子宫内膜癌癌旁组织,另取156例子宫内膜不典型增生组织,采用免疫组织化学法检测子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生和癌旁组织中SOX4的表达,并分析SOX4表达与子宫内膜癌患者临床特征的关系。采用慢病毒转染的技术方法建立SOX4过表达/沉默Ishikawa细胞株后,MTT、流式细胞术和Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,Western blotting检测SOX4、β-连环蛋白(β-catenin)和上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达变化。   结果  SOX4在子宫内膜癌组织中的表达高于癌旁组织和子宫内膜不典型增生组织(P<0.05)。SOX4表达与侵袭深度、国际妇产科联合会(FIGO)分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。与对照组相比,SOX4过表达的Ishikawa细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力显著增加,细胞凋亡率明显降低,蛋白SOX4和β-catenin表达水平明显升高,蛋白E-cadherin表达水平明显降低(均P<0.05)。SOX4干扰的Ishikawa细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,蛋白SOX4和β-catenin表达水平明显降低,蛋白E-cadherin表达水平明显升高(均P<0.05)。   结论  SOX4在子宫内膜癌组织中高表达,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌的发生发展。
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    微小RNA-98-5p靶向调控核糖核苷酸还原酶小亚基M2调控宫颈癌细胞顺铂的耐药性
    张霞 蒋志明 程晓燕 项艳 赵晓 黄玉萍 于皓
    2021 (3):  432-438.  doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.016
    摘要 ( )   PDF(4237KB) ( )  
    目的  探讨微小RNA(miR)-98-5p对顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞顺铂敏感性的调控及其机制。   方法  用脂质体法将DDP+miR-NC组(转染miR-NC)、DDP+miR-98-5p组(转染miR-98-5p mimics)、DDP+si-NC组(转染si-NC)、DDP+si-核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)组(转染si-RRM2)、DDP+miR-98-5p+pcDNA组(共转染miR-98-5p mimics和pcDNA)、DDP+miR-98-5p+pcDNA-RRM2组(共转染miR-98-5p mimics和pcDNA-RRM2)转染至HeLa/DDP组细胞;Real-time PCR、Western blotting、CCK-8、迁移实验(Transwell)和双荧光素酶报告基因检测细胞中miR-98-5p、RRM2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、基因金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达、细胞的抑制率、半数抑制浓度(IC50)、迁移和侵袭及荧光活性。   结果  与HeLa组细胞相比,HeLa/DDP组细胞中miR-98-5p表达显著降低,RRM2表达显著升高,IC50值显著升高(P<0.05);过表达miR-98-5p或抑制RRM2可明显抑制HeLa/DDP细胞的增殖、迁移和侵袭,下调cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白,上调P21蛋白;miR-98-5p明显抑制野生型RRM2细胞的荧光活性,并且过表达RRM2反转了miR-98-5p对HeLa/DDP细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。   结论  MiR-98-5p可抑制顺铂耐药宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,增强对顺铂的敏感性,其机制与靶向RRM2相关,将可为顺铂耐药宫颈癌细胞的治疗提供方向。
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