解剖学报

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基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca²⁺

肖云萍解宇浩张嘉琪郭佳琦丁旭郝峰王国庆

2021 (2): 311-316. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.024

摘要 ( )

PDF(2402KB) ( )

目的建立一种基于钙激活氯离子通道（CaCC）可敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1（ANO1）和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体，应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞，倒置荧光显微镜观察其表达情况，流式细胞仪检测细胞纯度；应用膜片钳技术研究CaCC生理特性；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂；荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca²⁺浓度。结果倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上，YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中；该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性；成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型；该模型可筛选CaCC调节剂，荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系；荧光变化斜率值可反映胞质内Ca²⁺浓度，该模型可敏感检测胞质内Ca²⁺浓度。结论此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺浓度，为Ca²⁺信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

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上腭发生的分子调控机制

许晨胡雪峰

2021 (2): 317-322. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.025

摘要 ( )

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哺乳动物上腭的发生包括原生腭和次生腭的发生。其中，次生腭的发生涉及到高度动态的形态发生过程，分为腭突生长及模式化，两侧腭突的上抬/重定位，两侧腭突的黏附和融合形成次生腭等过程。近来的研究表明，上腭发育所需的基因，包括了声波刺猬蛋白（Shh）、成纤维细胞生长因子（FGF）、转化生长因子β（TGF-β）和Wnt信号通路，这些信号通路之间存在相互调节，信号通路的异常都会引起腭发育异常，甚至出现腭裂。本文中我们综述了上腭发育过程中各个阶段至关重要的基因及调控网络的研究进展。

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微流控技术在辅助生殖领域应用的研究进展

王中立王琪邓娟雷兰杰杨磊

2021 (2): 323-328. doi: 0.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.026

摘要 ( )

PDF(1222KB) ( )

辅助生殖技术（ART）领域进展迅速，由于临床实践中操作步骤繁琐，如分选精子，卵母细胞的选择，体外受精，胚胎培养，胚胎的监测等，所以在效率和临床决策方面仍有进一步改进的需求。微流控技术既是技术手段也是一门科学，它是在亚微升水平研究流体的行为特征。其检测系统管道及检测终端具有极大灵活性，可适用于不同的检测目的，其检测精度高的同时节省样本量，具有高度集成性特征，与辅助生殖实践中的检测需求相匹配。应用微流控技术可以评估精子，卵母细胞和植入前胚胎结构功能和环境等基本生物学信息，并据此给予准确有效的应对方案和临床决策。基于上述内容，本文中我们就微流控技术在辅助生殖上的应用作一综述，以期推进微流控技术在生殖领域的应用和完善。

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黄芪甲苷通过诱导自噬减轻慢性间歇性低氧大鼠心脏损伤

覃露芸骆利飞关鹏孙智敏王娜

2021 (2): 270-276. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.017

摘要 ( )

PDF(6388KB) ( )

目的探讨黄芪甲苷（ASⅣ）对慢性间歇性缺氧（CIH）大鼠的心肌保护作用和机制。方法 SD雄性大鼠24只，随机分为对照组、CIH组、CIH+ASⅣ组和ASⅣ组，每组6只。CIH大鼠循环给予氮气和氧气，使氧气含量在9%～21%间循环，每个循环3 min，每天上舱8 h，共35 d。CIH+ASⅣ组和ASⅣ组每天给予黄芪甲苷干预，对照组和CIH组采用等量生理盐水灌胃。超声心动图检测大鼠心脏左心室功能；HE染色和麦胚芽凝集素染色检测左心室心肌结构；TUNEL检测心肌细胞凋亡；比色法检测心肌组织匀浆的超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛(MDA)含量；Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达水平。结果与对照组相比，CIH模型组大鼠左室射血分数（LVEF）及左心室收缩末期内径（LVIDs）降低，心肌纤维排列紊乱，心肌细胞增大，心肌细胞凋亡率增加，Bcl-2/Bax比率下降，SOD活性降低，MDA含量增加，Beclin1表达下降而P62表达上升，p-mTOR/mTOR比率升高。与CIH组相比，ASⅣ干预使LVEF和LVIDs上升，心肌纤维排列较整齐，心肌细胞无异常增大，心肌细胞凋亡率下降，Bcl-2/Bax比率增高，SOD活性增加，MDA水平下降，LC3 Ⅱ/Ⅰ比率增高，Beclin1表达增高而P62表达下降，p-mTOR/mTOR比率下降。结论 ASⅣ可能通过抑制mTOR诱导自噬，从而减轻CIH间歇性低氧对大鼠心脏的损伤。

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心脉隆注射液改善大鼠离体心脏心肌缺血/再灌注损伤

王永洁姜永良林志刘燃姜雪梅陆地孙林

2021 (2): 277-283. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.018

摘要 ( )

PDF(6450KB) ( )

目的探讨心脉隆注射液对大鼠离体心脏心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法 SPF级SD大鼠60只，随机分为6组，包括假手术(sham)组、I/R处理组以及心脉隆注射液处理组（50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L），每组10只；运用Langendorff灌流系统制作大鼠离体心脏I/R损伤模型，平衡时期持续灌注K-H液，离体心脏模型缺血复灌后灌注心脉隆注射液；多导生理转换仪Lab Chart 8.0数据采集分析软件，同步记录左心室发展压(LVDP)，描记左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)以及心率(HR)。采用生化仪检测不同组冠状动脉流出液中心肌酶学，肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白-Ⅰ（TnI）和肌红蛋白（MYO）；实时测量冠状动脉流量，运用TTC染色了解心肌梗死面积，采用Western blotting检测Bax、Bcl-2在各组中的表达。结果心脉隆注射液能够减轻心肌缺血再灌注损伤大鼠LVDP、最大上升速率+dp/dt、最大下降速率-dp/dt的下降，减少心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞酶的释放，减少心肌梗死面积，增加心脏冠状动脉流量，引起心率增快以及一定的抑制心肌凋亡作用。结论心脉隆注射液能够减轻心肌I/R损伤引起的心功能损害。

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高孕激素状态促排卵方案与其他3种促排卵方案体外受精-冻融周期的结果比较

李建华焦婷婷王建业李常山董攀陈曦张水文

2021 (2): 284-288. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.019

摘要 ( )

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目的比较高孕激素状态下促排卵（PPOS）方案与其他3种不同促排卵方案的实验室和临床妊娠结局。方法回顾性分析 2019年 6 月～ 2020 年 1 月在我院生殖中心行体外受精/卵泡浆内单精子显微注射（IVF/ICSI）共 430 个取卵周期和256个冻融周期，观察实验室相关数据、受精情况及妊娠结局的差异。结果取卵周期中，PPOS 方案 82 个，长方案 152个，短方案 116 个，拮抗剂方案 80 个。PPOS组获卵数（11.1±7.3）、受精率（85.6%）、卵裂率（95.1%）、可用胚胎数（4.5±3.1）、优质胚胎率（20.2%）等与其他3组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。冻融周期中，PPOS 方案 27个周期，拮抗剂方案 107个，长方案 78 个，短方案 44 个。PPOS组种植率（26.2%）、临床妊娠率（63.0%）和流产率（11.8%）与其他各组比较差异无显著性（P>0.05），但临床妊娠率和种植率高于其他各组（P>0.05）。结论 PPOS方案和其他3种促排卵相比，对卵泡发育、卵母细胞和胚胎质量没有影响，而且临床妊娠率和种植率有升高的趋势，可以作为常规促排卵方案的一种新的选择。

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卵泡液代谢标志物与多囊卵巢综合征患者卵母细胞质量的相关性

黄剑磊陈书强王明李辰龙穆静刘丹孙惠君王晓红

2021 (2): 289-294. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.020

摘要 ( )

PDF(865KB) ( )

目的探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵泡液中的代谢产物能否作为预测卵母细胞质量和早期胚胎发育的指标因子。方法根据中国身体质量指数(BMI)分类标准，将研究对象分为4组：正常对照组（LC）30例，肥胖组（OW）13例，瘦型PCOS组（LP）26例和肥胖PCOS组（OP）26例。采用超高效液相色谱-质谱联用技术进行卵泡液代谢组学分析；通过单因素方差分析比较组间患者临床特征，卵母细胞结局和卵泡液代谢物差异；利用 Pearson 相关性分析，探讨代谢物与受精率和优胚率的关系。结果与LC组相比，OP组的获卵数和优胚率显著增加，卵母细胞成熟率和受精率显著降低。通过代谢组学检测到卵泡液中有236种代谢物，与LC组和OW组相比，PCOS患者组有19种代谢物存在差异。此外，分别有7种脂质代谢物与受精率、优胚率成显著相关性，其中大多为溶血磷脂类。结论 PCOS患者与正常女性相比有多种卵泡液代谢物存在差异。这些差异代谢物中溶血磷脂类是影响卵母细胞质量和早期胚胎发育的重要因素，可作为评估PCOS患者卵母细胞质量的潜在标志物。

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核因子E2相关因子2对人永生化角质形成细胞氧化损伤的保护作用

毛志蓉刘芳杜杰邓莉高小青

2021 (2): 225-230. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.010

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目的探讨核因子E2相关因子2 (Nrf2)对过氧化氢(H2O2)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用。方法用慢病毒转染方式使HaCaT过表达Nrf2(Nrf2/HaCaT)，并用MTT法和抗Ki67免疫荧光染色法检测其增殖活性。实验分为Nrf2/HaCaT组和HaCaT组，每组5个样本。应用200 μmol/L H2O2处理两组细胞24 h以诱导氧化损伤，并用MTT法检测细胞活性，乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况，TUNEL染色检测细胞凋亡，ELISA法和比色法检测氧化应激相关指标Nrf2、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS），以及炎症相关因子白细胞介素（IL)-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、核因子κB（NF-κB）P65的含量。结果 Nrf2/HaCaT细胞增殖活性显著高于HaCaT(P<0.05)。经H2O2诱导后，Nrf2/HaCaT活性较HaCaT高(P<0.05)，LDH释放及凋亡率较HaCaT低(P<0.05)，其上清液中的抗氧化物Nrf2、GSH和SOD水平较HaCaT高(P<0.05)，而氧化产物ROS、MDA以及炎症因子IL-6、TNF-α和NF-κB P65水平较HaCaT低(P<0.05)。结论 Nrf2过表达可促进HaCaT增殖及减轻H2O2诱导的细胞氧化和炎性损伤。

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乌司他丁对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障损伤的保护及其对Wnt信号通路的影响

王宇辉叶八宁吴婧龙大利李琨施贤清

2021 (2): 295-299. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.021

摘要 ( )

PDF(2326KB) ( )

目的探讨乌司他丁（尿抑制素，UTI）能否对大鼠脓毒症肠黏膜损伤提供保护及其机制。方法选取SD大鼠100只，采用计算机软件随机分为对照组、脓毒症组、乌司他丁组、XAV939+乌司他丁组、氧化锂（LiCl ）+乌司他丁组。以经典盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型，检查评估空肠黏膜的损伤。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子白细胞介素（IL-6）及肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，采用Real-time PCR、Western blotting检测乌司他丁对β-连环蛋白（β-catenin）和细胞周期蛋白（cyclin D1）的表达情况；观察XAV939阻断或者LiCl激活Wnt信号通路对乌司他丁保护大鼠肠黏膜及Wnt信号通路相关蛋白的影响。结果脓毒症组IL-6、TNF-α水平及肠道黏膜损伤评分均显著高于乌司他丁组；脓毒症组β-catenin及cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平均较对照组显著升高，差异具有显著性（P<0.05），给予乌司他丁处理之后，β-catenin及cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低，差异具有显著性（P<0.05）；与乌司他丁相比，XAV939促进了乌司他丁对大鼠肠黏膜的保护的作用，而且β-catenin和cyclin D1的蛋白表达降低（P<0.05）；LiCl减弱了乌司他丁对大鼠肠黏膜的保护作用，而且β-catenin和cyclin D1的蛋白表达升高，差异具有显著性（P<0.05）。结论乌司他丁通过下调β-catenin的表达抑制Wnt信号通路，降低炎症因子IL-6、TNF-α表达，从而改善脓毒症导致的肠黏膜屏障功能损伤。

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大鼠肝再生氨基酸靶向代谢组学分析

杨晖徐存拴

2021 (2): 210-215. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.008

摘要 ( )

PDF(2481KB) ( )

目的探讨氨基酸代谢对大鼠肝再生 (LR)的调控作用。方法大鼠随机分为10组，每组5只，包括9个部分肝切除组 (PH)和1个正常对照组。运用质谱选择反应检测扫描/多反应检测扫描 (SRM/MRM)对大鼠肝再生中10个时间点的20种氨基酸的含量进行靶向代谢组学鉴定，并对氨基酸含量变化进行聚类分析。结果丙氨酸在30、36和72 h上调；精氨酸在6和12 h上调；天冬氨酸在6、12和36 h上调；谷氨酸在6、12、30、36、72和120 h上调；组氨酸在12、24、30、36、72和120 h上调；谷氨酰胺在72 h上调；异亮氨酸在24 h下调。通过对氨基酸聚类分析发现，这些氨基酸可以聚为3类。结论肝再生过程中多种氨基酸发生了变化，且贯穿大鼠肝再生的全过程。氨基酸含量的变化，对肝再生中肝细胞增殖有重要作用。

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大鼠肝再生中环状RNA的表达变化及其对细胞增殖的调节作用

郭学强郭建林靳伟常翠芳徐存拴陈广文

2021 (2): 216-224. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.009

摘要 ( )

PDF(5145KB) ( )

目的探讨环状RNA（circRNA）在大鼠肝再生中的表达变化及其对细胞增殖的调节作用。方法用生物高通量检测方法分析114只2/3肝切除大鼠诱导的大鼠肝再生中circRNA的表达变化，用miRanda和TargetScan网站分析大鼠肝再生的靶微小RNA（miRNA）及其mRNA，用基因本体论（GO）和IPA软件分析大鼠肝再生涉及的生理活动和信号通路，用Cytoscape v3.0.2软件构建大鼠肝再生的相互作用网络，用表达模式结合靶miRNA数量和功能挑选候选关键circRNA。结果在大鼠再生肝材料中检测到20 878个circRNA，其中，560个发生差异表达，它们中的126个能与117个靶miRNA结合，后者调节6510个下游靶mRNA。这些靶mRNA涉及细胞增殖、应激反应、物质代谢等生理活动和转化生长因子β（TGF-β）、蛋白激酶A（PKA）、Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）等信号通路。其中，circRNA_03651、circRNA_03653、circRNA_04500、circRNA_05865、circRNA_11274、circRNA_13559等6种circRNA可能通过12种miRNA调节15种mRNA进而在大鼠肝再生涉及的细胞增殖中发挥作用，视为大鼠肝再生的候选关键circRNA。结论大鼠肝再生中560个circRNA发生差异表达，其中circRNA_03651、circRNA_03653、circRNA_04500、circRNA_05865、circRNA_11274、circRNA_13559等6种circRNA通过12种miRNA和15种mRNA的相互作用网络支配大鼠肝再生涉及的细胞增殖。

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内蒙古蒙古族察哈尔部人体组成成分分析

吴超李咏兰

2021 (2): 300-305. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.022

摘要 ( )

PDF(882KB) ( )

目的探讨内蒙古蒙古族察哈尔部的人体组成成分的现状及特点。方法采用生物电阻抗分析法，对内蒙古蒙古族察哈尔部403(男161，女242)例成人进行人体组成成分的测量。结果男性躯干脂肪率最高，总体脂率和下肢脂肪率接近，上肢脂肪率最低；女性躯干脂肪率、总体脂率、下肢脂肪率相近，高于上肢脂肪率；男、女性左、右上肢及左、右下肢脂肪率均接近，男、女性均为躯干肌肉量最大，下肢肌肉量中等，上肢肌肉量最小。相关分析结果表明，男性躯干脂肪率与年龄成正相关，体脂率、左右上肢肌肉量、身高、推定骨量、内脏脂肪等级、躯干肌肉量与年龄成负相关，其余10项指标均与年龄不相关。女性躯干脂肪率与内脏脂肪等级随年龄增长成正相关，身高、总肌肉量、推定骨量、躯干肌肉量成负相关，其余12项指标均与年龄无线性关系。结论从人体组成成分上看，内蒙古蒙古族察哈尔部总体脂率和身体质量指数（BMI）数值处于中等，低于新疆等西部蒙古族，高于东部蒙古族；低于北方西部族群，高于南方族群。

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醛固酮合成酶基因启动子-344T/C 多态性与青海省汉族孕妇子痫前期的相关性

李文佳王茹段倩李长兴李红荣李建华

2021 (2): 306-310. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.023

摘要 ( )

PDF(1669KB) ( )

目的探讨青海省汉族孕妇子痫前期（PE）与醛固酮合成酶基因（CYP11B2）启动子区单核苷酸多态性的关系。方法选择青海省PE患者149例，正常妊娠对照组155 例，应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性 (PCR-RFLP) 方法，分析PE组和对照组CYP11B2-344T/C多态性分型并测序验证。结果 PE组基因型频率TT型、CT型及CC型分别为43.0%、45.6%和11.4%，对照组分别为51.0%、45.1%和3.9%。PE组和对照组醛固酮合酶基因-344T/C位点等位基因T和C频率分布具有差异性(P<0.05)，PE组C等位基因频率高于对照组（χ2=4.354，P<0.05, OR=0.691, 95% CI=0.49～0.98）。结论 CYP11B2-344T/C多态性与青海省子痫前期有关，C等位基因可能是子痫前期的易感基因。

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足底内侧和外侧群肌的肌内神经整体分布模式及临床意义

罗林芬邓群陈立云李亚芳杨胜波

2021 (2): 264-269. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.016

摘要 ( )

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目的揭示足底内侧和外侧群肌的肌内神经整体分布模式，探讨其临床意义。方法 24具成年尸体，完整取下足底内侧和外侧群肌，采用改良Sihler染色显示肌内神经分布模式。结果母收肌的神经支从肌止端的深面入肌，而母展肌、母短屈肌、小趾展肌和小趾短屈肌的神经支常从肌起端的深面入肌。母展肌中有1个半月形和1个长方形的肌内神经密集区（INDR）；母收肌横头内有2个肾形INDRs，斜头内有1个肾形和1个长方形的INDR；母短屈肌、小趾展肌和小趾短屈肌内均有2个长方形的INDRs。这5块肌均可分为2个神经肌肉亚部，但各肌的INDR及其中心点在肌长上的百分位置不同。结论上述结果可为外科手术免于神经损伤，肌移植的选材匹配，以及注射肉毒毒素A阻滞这些肌肉的痉挛提供形态学指导依据。

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靶向叉头框蛋白J2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建及其对肝癌细胞转化生长因子β/Smads表达和增殖的影响

曲明娟郑煜李延敏宋洋王蕾周菊华

2021 (2): 231-236. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.011

摘要 ( )

PDF(5347KB) ( )

目的构建靶向叉头框蛋白J2（FOXJ2）的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9（CRISPR/Cas9）基因敲除质粒，探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白（TGF-β/Smads）表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA（sgRNA）序列，与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌，挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6，对照组只转染空载体，48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用，同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况；MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs，其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达，同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组，差异显著；并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达，抑制细胞的增殖，推测在体情况下，肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性，FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。

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乳腺癌中蛋白高乙酰化/琥珀酰化水平及其同组蛋白2AX高表达的相关性

高秀丽岳丽玲赵月生刘立琨刘得水朱文斌周丽

2021 (2): 244-250. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.013

摘要 ( )

PDF(5045KB) ( )

目的明确乳腺癌中蛋白乙酰化/琥珀酰化修饰和组蛋白2AX（H2AX）表达水平，并确认两者之间是否具有相关性。方法 Western blotting及RT-PCR方法检测11例乳腺癌组织和细胞中蛋白修饰和H2AX表达水平，并利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂初步明确乙酰化和琥珀酰化可能存在的共同调控方式；载体构建及过表达方法明确H2AX表达同蛋白修饰之间的相关性。结果同正常乳腺组织相比，乳腺癌组织中蛋白乙酰化/琥珀酰化水平增加，且两者可能受组蛋白去乙酰化酶（HDAC）家族成员的共同调控。乳腺癌组织及细胞中H2AX mRNA及蛋白表达水平增加，且其表达水平同代表核仁磷蛋白1（NPM1）的表达及修饰水平成正相关。结论乳腺癌具有蛋白高乙酰化/琥珀酰化修饰及H2AX高表达的特点，且H2AX表达水平同部分蛋白修饰水平成正相关。

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基于质粒的蛋白激酶B1特异性小干扰RNA和P53共表达协同抑制肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭

陈小龙万亚锋黄平

2021 (2): 251-257. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.014

摘要 ( )

PDF(6293KB) ( )

目的探讨蛋白激酶B1（Akt1）特异性小干扰RNA（siRNA）和p53共表达质粒对肝细胞癌（HCC）细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法构建了一种共表达蛋白激酶B1（Akt1）特异性siRNA和野生型p53基因的双表达质粒(pSi-Akt1-P53)。将pSi-Akt1-P53共表达质粒转染至肝癌HepG2细胞，采用Real-time PCR法和免疫印迹法检测细胞中Akt1和P53表达被调控情况。然后将这种共表达质粒转染至HepG2细胞中，并同shAkt1质粒和P53质粒相比较，分别采用CCK-8和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）实验、划痕实验、Transwell小室法、流式细胞术检测其对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果 pSi-Akt1-P53共表达质粒转染至肝癌HepG2细胞后显著地减少HepG2细胞中Akt1蛋白的表达，同时显著增加P53蛋白的表达。与shAkt1质粒和P53质粒相比，pSi-Akt1-P53共表达质粒更显著地抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时更显著地促进HepG2细胞的凋亡。结论 pSi-Akt1-P53共表达质粒能非常显著地抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力，有效促进肝癌HepG2细胞凋亡。

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低氧通过上调乙酰辅酶A羧化酶1促进肺腺癌A549细胞迁移

金家豪赵宝生刘丹辉刘玉珍

2021 (2): 258-263. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.015

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目的探讨低氧通过乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）促进人肺腺癌A549细胞迁移的机制。方法低氧（5％ O2）处理肺腺癌A549细胞，应用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力，Western blotting检测ACC1表达及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平。

结果与常氧（对照组）相比，低氧处理促进了A549细胞的迁移（P＜0.01），低氧处理后ACC1表达上调（P＜0.01），同时波形蛋白（vimentin）表达增加（P＜0.05），E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达下降（P＜0.01）；敲除ACC1后与对照组相比，A549细胞的迁移能力减弱（P＜0.05），vimentin表达下降（P＜0.05），E-cadherin表达增加（P＜0.01）；敲除ACC1后A549细胞在常氧和5％ O2条件下迁移数目及vimentin、E-cadherin表达变化无统计学意义（P＞0.05）；补充亚油酸（LA）恢复低氧对A549细胞的促迁移作用（P＜005）。结论低氧通过上调ACC1的表达促进肺腺癌A549细胞迁移及EMT转化。

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轴丝动力蛋白中链基因1在肺腺癌中低表达且抑制肺腺癌细胞侵袭能力

张琳王雪婷王晓栋王玉李春涛尹崇高李洪利

2021 (2): 237-243. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.012

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目的探讨轴丝动力蛋白中链基因1（DNAI1）在肺腺癌（LUAD）中的表达情况以及对肺腺癌侵袭能力的影响。方法微阵列基因芯片筛选肺腺癌组织(3例)与癌旁组织（3例）的差异表达基因；聚类热图(heatmap)、火山图（volcano plot）展示筛选后mRNA的表达和分布情况；利用DAVID数据库进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析； STRING数据库和Cytoscape 3.6.1软件进行蛋白相互作用（PPI）分析并筛选核心基因（Hub基因)；结合DEGs、Ualcan数据库中各Hub基因在肺腺癌中的差异表达情况选择目的基因DNAI1；Real-time PCR、Western blotting检测DNAI1在人正常肺上皮细胞系BEAS-2B和肺腺癌细胞系H1299、A549中的表达情况；过表达DNAI1后观察细胞形态学变化；侵袭实验检测对A549细胞侵袭能力的影响。结果基因芯片结果筛选出86个上调基因和396个下调基因；差异基因参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控，凋亡过程的负调控，蛋白结合等功能，在胞内广泛分布，与代谢途径和癌症相关途径等信号通路有密切联系；DEGs和Ualcan数据库显示，筛选出的10个Hub基因中，DNAI1在肺腺癌组织中下调且差异表达较为显著；Real-time PCR和Western blotting结果显示，相较于人正常肺上皮细胞系BEAS-2B，DNAI1在肺腺癌细胞系H1299、A549中低表达；过表达DNAI1后A549细胞变圆，并有少数脱落；侵袭实验结果表明，过表达DNAI1后A549细胞侵袭能力显著降低。结论 DNAI1在肺腺癌中低表达且抑制肺腺癌细胞侵袭能力。

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铁转运相关蛋白在肌萎缩性侧索硬化症转基因鼠脊髓中的表达变化

张雅雯高莹孙菡聪张皓云王凤斌

2021 (2): 161-167. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.001

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目的探讨肌萎缩性侧索硬化症（ALS）转基因鼠脊髓内铁转运相关蛋白表达变化与铁稳态失衡的关联。方法选取hSOD1G93A转基因鼠（ALS鼠）和同窝野生型鼠（WT鼠），分别于生后70、95和122 d分离脊髓，每时间点每组各9只实验动物。Western blotting检测脊髓组织内铁转运蛋白二价金属转运蛋白-1（DMT1）、铁转运蛋白-1（FPN1）及调节蛋白铁调节蛋白-1（IRP1）的表达；免疫荧光双重标记检测脊髓腰段前角内细胞共定位情况。结果 Western blotting显示，与WT鼠比较，各时间点ALS鼠脊髓内DMT1表达均显著降低（P<0.05，P<0.01）；70 d FPN1表达升高（P<0.05），95 d和122 d表达下降（P<0.01）；95 d、122 d IRP1表达降低（P<0.01）。免疫荧光双重标记显示，在70 d WT鼠和ALS鼠腰段脊髓中DMT1主要与β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulin Ⅲ）共表达。与WT组相比，95 d ALS鼠脊髓腰段前角神经元内DMT1免疫反应强，而FPN1荧光强度减弱。随疾病进展，DMT1、FPN1与反应性胶质细胞共定位表达增多。IRP1随疾病进展表达强度降低。结论随ALS病程进展，发病早期神经元铁转入增加，转出减少，反应性神经胶质细胞铁转运活性增强，参与局部铁稳态失衡及脊髓前角运动神经元进行性丢失。IRP1表达降低，部分参与局部铁代谢调节。

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上海脑库脑组织样本的质量控制分析

李凤娇咸伟伟卜硕蕾曹静丽吴劲松李文生尤琳雅

2021 (2): 168-174. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.002

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目的通过对脑脊液pH值、脑组织RNA完整值（RIN）、转录组和蛋白质组检测以及形态学观察，评估上海脑库收集的脑组织用于后续生物学研究的可行性。方法使用pH试纸检测新鲜脑脊液pH值；使用安捷伦RNA 6000 Nano芯片和2100生物分析仪对低温冻存的脑组织RNA进行完整性检测；使用BGIseq-500测序仪对低温冻存的颞上回（STG）或尾状核（CN）进行转录组测序；使用Q Exactive HF质谱仪对低温冻存脑组织进行蛋白质组分析；使用HE染色观察STG的形态学。结果捐献脑组织样本的脑脊液pH值在6.5左右；65%以上的低温冻存脑组织的RIN>6，RNA质量较好；转录组测序过滤后clean reads比值>20或30的碱基数占总碱基数比例基本达到80%以上，表明文库质量较高；质谱分析得到超过4000个蛋白质组，3万多个肽段，说明蛋白数据质量较好；脑组织形态学较为正常，能清晰观察到神经元形态。结论上海脑库脑组织样本的RNA和蛋白质质量能用于开展分子生物学相关研究，并可用于形态学观察。

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血管紧张素受体1 相关受体蛋白在出生后小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经元内的动态表达

尹海燕王择雨郝长江张慧王凤琴李秀国陈京

2021 (2): 175-181. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.003

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目的探讨血管紧张素受体1 相关受体蛋白（APJ）在出生后C57BL/6小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经元成熟过程的时空表达规律。

方法分别取出生后7 d（P7）、P14、P28和出生后2月（P2M）时间点各11只C57BL/6小鼠的耳蜗组织， Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光检测APJ在不同时间点耳蜗毛细胞和螺旋神经元表达。结果 Real-time PCR、Western blotting结果显示，APJ在P7～P2M的耳蜗组织内表达呈上升趋势；免疫荧光结果显示，APJ在P14小鼠毛细胞和螺旋神经元中的表达明显上升，并持续至P2M； P14小鼠APJ在毛细胞和螺旋神经元内的表达呈现出从底转到顶转的下降趋势。结论 APJ在出生后的小鼠耳蜗成熟过程中表现出独特的时空模式，可能参与耳蜗成熟和听力的形成和维持。

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亨廷顿相关蛋白1在丙戊酸钠诱导神经干细胞分化过程中的表达和作用

王珊珊李雯何辉秦建兵田美玲赵荷艳成翔金国华

2021 (2): 182-188. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.004

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目的探讨丙戊酸钠（VPA）诱导神经干细胞（NSCs）向神经元分化过程中亨廷顿相关蛋白1（HAP-1）的表达及其作用。方法分离培养SD大鼠海马NSCs，应用Real-time PCR 和Western blotting检测VPA诱导NSCs向神经元分化过程中0、1、3和5d时HAP-1 mRNA和蛋白的表达变化；Real-time PCR检测成年SD大鼠多组织及NSCs、神经元和星形胶质细胞中HAP-1 mRNA的表达；应用小干扰RNA技术下调NSCs中HAP-1的表达后, Real-time PCR和Western blotting分别检测神经元特异分子微管解聚蛋白2（Stmn-2）、神经元分化因子1（Neurod-1）、微管相关蛋白2（Map-2）和突触蛋白1（Syn-1）基因和神经元特异性标志物β-微管蛋白Ⅲ（Tuj-1）的表达水平，应用免疫荧光检测NSCs向Tuj-1阳性神经元分化的比例，并观察神经元发育情况。结果与对照组相比，VPA组NSCs向神经元分化过程中HAP-1 mRNA和蛋白在VPA处理后1 d和3 d表达明显上调；HAP-1 mRNA 在中枢神经系统的海马中呈优势表达，在神经元中表达较高，NSCs中表达较低，星形胶质细胞中表达最低；干扰HAP-1表达后，VPA诱导NSCs向神经元分化的比例减少，神经元发育变差。结论 VPA可能通过上调HAP-1的表达促进NSCs向神经元分化。

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石菖蒲挥发油对炎症痛大鼠基底外侧杏仁核中胶质纤维酸性蛋白和即刻早期基因表达的影响

李诗琪杨翠珠刘鸿庆张春梅田素民刘靖马宇昕李国营

2021 (2): 189-195. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.005

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目的通过注射完全弗氏佐剂(CFA)构建炎症痛大鼠模型，探讨石菖蒲挥发油对炎症痛大鼠基底外侧杏仁核(BLA)中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和即刻早期基因(c-fos)表达的影响。方法成年SD雄性大鼠36只，随机分为6组: 对照（control）组、假手术（sham）组、CFA组、CFA+5 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组、CFA+10 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组、CFA+20 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组，每组各6只动物，于灌胃21 d后取材。采用免疫荧光及Western blotting技术检测各组大鼠BLA中GFAP和c-fos表达量的变化。结果免疫荧光及Western blotting结果均显示，与control组相比，CFA组大鼠BLA中GFAP及c-fos阳性表达均显著增多(P<0.01)；与CFA组相比，石菖蒲挥发油处理组GFAP和c-fos阳性表达均降低，且表达量呈剂量依赖性递减(P<0.01)；其中，高剂量组GFAP和c-fos阳性表达的下降趋势较低剂量组相比更为显著(P<0.01)。结论石菖蒲挥发油可减少CFA诱导的炎症性疼痛大鼠BLA中星形胶质细胞表达，并进一步抑制c-fos的表达。

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胡黄连苷Ⅱ干预脑缺血/再灌注损伤后p38 丝裂原活化蛋白激酶信号通路的作用机制

于竹芹汪贯习王潇璐王悦王婷婷

2021 (2): 196-204. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.006

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目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的影响及其神经保护作用机制。方法成年健康雄性Wistar大鼠150只，应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型，按照随机对照原则，动物分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、茴香霉素（p38 MAPK激活剂）组、茴香霉素+胡黄连苷组和SB203580（p38 MAPK抑制剂）组和SB203580+胡黄连苷组。改良神经功能评分（mNSS）法评价大鼠神经行为功能，HE染色观察神经细胞的形态结构， TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组织化学法检测脑组织磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达水平，Western blotting检测大鼠皮质区p-p38 MAPK、磷酸化MAPK激活的蛋白激酶2（p-MK2）、磷酸化胞质磷脂酶A2（p-cPLA2）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）。结果假手术组大鼠无神经功能缺损。模型组大鼠神经功能缺损评分升高，皮质区神经细胞损伤加重，脑梗死体积增大，凋亡细胞增多，p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2、IL-6及TNF-α蛋白表达增强。胡黄连苷组、SB203580组和SB203580+胡黄连苷组大鼠皮质区神经元损伤较轻，凋亡细胞数量明显减少，p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达较模型组明显降低。茴香霉素组、茴香霉素+胡黄连苷组各项指标与模型组相近，脑梗死体积较大，神经功能缺损较重，p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达升高。结论脑缺血损伤后激活p38 MAPK信号通路介导神经元凋亡和炎症反应，胡黄连苷Ⅱ可能通过降低p38 MAPK通路的活化，抑制神经元凋亡和炎症反应从而保护神经系统。

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壳聚糖包载人脐带间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠的治疗作用及机制

张宇薛茜宋笑雨尹卫东邹玉安

2021 (2): 205-209. doi: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.007

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目的探讨壳聚糖包载人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对创伤性脑损伤大鼠的治疗效果及相关机制。方法构建40只创伤性脑损伤SD大鼠模型，根据干预方案的不同，分为对照组(n=10)和壳聚糖组(n=10)、干细胞组(n=10)和联合治疗组(n=10)，采用mNSS量表评价大鼠运动功能，Morris水迷宫法评价学习记忆能力，利用Western blotting法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、微管相关蛋白 2(MAP2)、脑源性神经营养因子（BDNF）和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达，比较几种治疗方式的差异。结果术后第1天、4天和8天，各组大鼠的mNSS评分基本一致（P＞0.05）。在治疗过程中，对照组与壳聚糖组的mNSS评分差异无显著性（P＞0.05）。在第15天、22天、29天和36天，与对照组相比，联合治疗组mNSS评分下降幅度最明显，干细胞组次之（P<0.05）。水迷宫实验结果显示，随着治疗时间的延长，各组大鼠的逃避潜伏时间均逐渐降低。与对照组相比，联合治疗组逃避潜伏时间下降幅度最明显，干细胞组次之（P<0.05）；同时干细胞组与联合治疗组大鼠所在象限停留时间显著长于对照组及壳聚糖组（P＜0.05）。免疫荧光结果显示，在蓝色背景下，治疗组大鼠脑组织内呈红色荧光表现的β-Ⅲ tubulin阳性的细胞数量显著高于对照组。与对照组相比，壳聚糖组的NSE、NEUN、MAP2、BDNF和Bcl-2蛋白表达量无明显变化（P＞0.05），干细胞组及联合治疗组相关蛋白表达量明显升高。两两比较后发现，联合治疗组相关蛋白的表达量最高，干细胞组次之，对照组及壳聚糖组最低，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论与单纯干细胞移植相比，壳聚糖包载hUC-MSCs移植可通过促进受损部位细胞再生，有效地改善创伤性脑损伤大鼠的运动及学习记忆能力。

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